Y187 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10

 Y187 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10操(cao)作方(fang)法（以(yi)下(xia)操(cao)作均按(an)無(wu)菌(jun)條件(jian)的標(biao)準(zhun)進(jin)行）
1 取感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞置於冰浴中，如需分裝可(ke)將剛(gang)融(rong)化細(xi)胞懸(xuan)液分(fen)裝到(dao)無菌(jun)預冷(leng)的離(li)心(xin)管中，置於冰浴中。
●  壹次(ci)轉化感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞的(de)建議用(yong)量為(wei)50-100 μl，可以(yi)根據實際(ji)情(qing)況(kuang)分裝使用(yong)。應(ying)註意所用(yong)DNA 體積不要超過(guo)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞懸(xuan)液體積的(de)十分之(zhi)壹(yi)。
以(yi)下(xia)實(shi)驗(yan)以(yi)100 μl感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞為(wei)例(li)。
 Y187 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*102 向(xiang)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞懸(xuan)液中加入目的DNA（100 μl 的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞能(neng)夠(gou)被(bei)1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質粒(li)DNA 所飽(bao)和），輕輕旋(xuan)轉離心(xin)管以(yi)混勻(yun)內(nei)容物，在冰(bing)浴中靜置30 分鐘。
3 將離(li)心(xin)管置於42℃水浴中放(fang)置60-90 秒，然後快速(su)將管(guan)轉移到(dao)冰浴中，使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分(fen)鐘(zhong)，該過(guo)程不要搖動離心(xin)管。
4 向(xiang)每(mei)個(ge)離(li)心(xin)管中加入900 μl 無(wu)菌(jun)的SOC 或(huo)LB 培(pei)養(yang)基（不含抗(kang)生(sheng)素(su)）， 混勻(yun)後置於37℃搖床(chuang)振蕩培(pei)養(yang)1 小(xiao)時（160-220 轉/分鐘(zhong)），目的是(shi)使質粒(li)上(shang)相關的(de)抗(kang)性(xing)標(biao)記基因表(biao)達(da)，使菌(jun)體復蘇。
 Y187 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*105 將離(li)心(xin)管內(nei)容(rong)物混勻(yun)，吸(xi)取100 μl 已(yi)轉化的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞加(jia)到(dao)含相應(ying)抗(kang)生(sheng)素(su)的(de)SOB 或(huo)LB 固(gu)體瓊脂培(pei)養(yang)基上(shang)，用(yong)無菌(jun)的彎(wan)頭(tou)玻(bo)棒(bang)輕輕的(de)將細(xi)胞均(jun)勻(yun)塗(tu)開。將平(ping)板置於室溫直至(zhi)液體被吸收，倒(dao)置平(ping)板，37℃培(pei)養(yang)12-16 小(xiao)時。
●  塗(tu)布(bu)用(yong)量可(ke)根據具體實驗(yan)來調整(zheng)。如轉化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)多(duo)，可(ke)取更少(shao)量轉化產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板；反之(zhi)，如(ru)轉化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)少，可取200-300 μl 轉化產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板。如果預(yu)計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較(jiao)少，可通過(guo)離(li)心(xin)（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）後吸除(chu)部(bu)分培(pei)養(yang)液，懸(xuan)浮(fu)菌(jun)體後將其塗布(bu)於壹個(ge)平(ping)板中。（塗布(bu)剩余(yu)的(de)菌(jun)液可(ke)置於4℃保(bao)存(cun)，如(ru)果(guo)次(ci)日的轉化菌(jun)落數過(guo)少(shao)可以(yi)將剩下(xia)的(de)菌(jun)液再(zai)塗布(bu)新(xin)的培(pei)養(yang)板）
 註意事項
1. 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞應(ying)保(bao)存(cun)在 -70℃，不可多(duo)次(ci)凍(dong)融(rong)和放(fang)置時間(jian)過(guo)長(chang)，以(yi)避(bi)免(mian)降低(di)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞的(de)轉化效率(lv)。
2. 進(jin)行轉化操(cao)作(zuo)時(shi)，應(ying)根(gen)據相應(ying)溫(wen)度(du)及(ji)無菌(jun)條件(jian)的要求進(jin)行。
3 為防(fang)止轉化實(shi)驗(yan)不成功(gong)，可(ke)以(yi)保(bao)留(liu)部(bu)分連(lian)接反應(ying)液，以(yi)重新(xin)轉化，將損(sun)失(shi)降到(dao)低。
以(yi)下(xia)是(shi)的(de)相關產(chan)品(pin)：

 SE 人金葡(pu)菌(jun)腸(chang)毒(du)素(su) 規(gui)格： 48T/96T

 ADAM8 人(ren)解(jie)整(zheng)合(he)素(su)樣(yang)金屬蛋白(bai)酶8 規(gui)格： 48T/96T

 UU-Ab 人(ren)解(jie)脲(niao)脲原體抗(kang)體 規(gui)格： 48T/96T

 CNTF 人(ren)睫(jie)狀(zhuang)神(shen)經營養(yang)因子 規(gui)格： 48T/96T

 TB-Ab IgG 人(ren)結核菌(jun)桿抗(kang)體IgG 規(gui)格： 48T/96T

 Hpt/HP 人(ren)結合(he)珠(zhu)蛋白(bai)/觸珠蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 CTGF 人(ren)結締組織(zhi)生(sheng)長(chang)因(yin)子 規(gui)格： 48T/96T

 CTAPⅢ 人(ren)結締組織(zhi)活(huo)化肽(tai)Ⅲ 規(gui)格： 48T/96T

 Des 人(ren)結蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 CCA 人(ren)結腸(chang)癌抗(kang)原(yuan) 規(gui)格： 48T/96T

 Cav-1 人(ren)窖(jiao)蛋白(bai)Caveolin1 規(gui)格： 48T/96T

 KGF 人(ren)角(jiao)化細(xi)胞生(sheng)長因子 規(gui)格： 48T/96T

 KAF 人(ren)角(jiao)化細(xi)胞內(nei)分泌因子 規(gui)格： 48T/96T

 GDNF 人(ren)膠(jiao)質(zhi)細胞系(xi)來源(yuan)的神(shen)經(jing)營養(yang)因子 規(gui)格： 48T/96T

 Collectin 人(ren)膠(jiao)原(yuan)凝集(ji)素(su) 規(gui)格： 48T/96T

 Collagenase II 人(ren)膠(jiao)原(yuan)酶II 規(gui)格： 48T/96T

 Collagenase I 人(ren)膠(jiao)原(yuan)酶I 規(gui)格： 48T/96T

 HCBⅡ 人(ren)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)Ⅱ 規(gui)格： 48T/96T

 PYD 人(ren)膠(jiao)原(yuan)吡啶交聯 規(gui)格： 48T/96T

 PCP 人(ren)膠(jiao)原(yuan)C端肽酶(mei) 規(gui)格： 48T/96T

 DAF 人(ren)降解(jie)加速(su)因(yin)子 規(gui)格： 48T/96T

 PCT 人(ren)降鈣(gai)素(su)原(yuan) 規(gui)格： 48T/96T

 CGRP 人(ren)降鈣(gai)素(su)基因相關肽(tai) 規(gui)格： 48T/96T

 CT 人(ren)降鈣(gai)素(su) 規(gui)格： 48T/96T

 BFP 人(ren)堿(jian)性(xing)胎(tai)兒蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 ALP 人(ren)堿(jian)性(xing)磷酸(suan)酶(mei) 規(gui)格： 48T/96T

 bFGF-9 人(ren)堿(jian)性(xing)成(cheng)纖維細胞生(sheng)長因子9 規(gui)格： 48T/96T

 bFGF-6 人(ren)堿(jian)性(xing)成(cheng)纖維細胞生(sheng)長因子6 規(gui)格： 48T/96T

 bFGF-4 人(ren)堿(jian)性(xing)成(cheng)纖維細胞生(sheng)長因子4 規(gui)格： 48T/96T

 bFGF 人(ren)堿(jian)性(xing)成(cheng)纖維細胞生(sheng)長因子 規(gui)格： 48T/96T

 Cx 人(ren)間(jian)隙(xi)連接蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 ALK 人(ren)間(jian)變(bian)性(xing)淋(lin)巴瘤(liu)激酶 規(gui)格： 48T/96T

 TAb 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)素(su)抗(kang)體 規(gui)格： 48T/96T

 T4 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)素(su) 規(gui)格： 48T/96T

 TG 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)球(qiu)蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 TAb 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)抗(kang)體 規(gui)格： 48T/96T

 TBG 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)結合(he)球(qiu)蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 TPO 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)過(guo)氧(yang)化物酶(mei) 規(gui)格： 48T/96T

 Y187 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10 THAA 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)非肽激(ji)素(su)抗(kang)體 規(gui)格： 48T/96T

 TSI 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)刺激免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白(bai) 規(gui)格： 48T/96T

 PTHrP 人(ren)甲狀(zhuang)旁(pang)腺(xian)激(ji)素(su)相關蛋白(bai) 規(gui)格： 4