AH109 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10

AH109 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10 操(cao)作方法(fa)（以下(xia)操(cao)作均(jun)按(an)無菌條(tiao)件的(de)標(biao)準(zhun)進(jin)行(xing)）
1 取感受(shou)態(tai)細胞置於冰(bing)浴中(zhong)，如需分裝可(ke)將(jiang)剛融化(hua)細胞懸(xuan)液(ye)分裝到(dao)無菌預(yu)冷(leng)的離(li)心管(guan)中(zhong)，置於冰(bing)浴中(zhong)。
●  壹(yi)次轉(zhuan)化(hua)感受(shou)態(tai)細胞的(de)建(jian)議用量(liang)為(wei)50-100 μl，可(ke)以根(gen)據(ju)實際(ji)情況(kuang)分裝(zhuang)使用。應註(zhu)意所(suo)用DNA 體(ti)積不要(yao)超(chao)過感受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)體積的(de)十分(fen)之(zhi)壹(yi)。
以下(xia)實(shi)驗(yan)以100 μl感受(shou)態(tai)細胞為(wei)例。
AH109 感受(shou)態(tai)細胞100ul*102 向(xiang)感受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)中(zhong)加入(ru)目(mu)的DNA（100 μl 的(de)感受(shou)態(tai)細胞能夠(gou)被(bei)1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質粒DNA 所(suo)飽和），輕(qing)輕旋(xuan)轉(zhuan)離(li)心(xin)管(guan)以混勻內容物，在冰(bing)浴中(zhong)靜(jing)置30 分鐘(zhong)。
3 將(jiang)離心(xin)管置於42℃水(shui)浴中(zhong)放置60-90 秒，然(ran)後(hou)快(kuai)速(su)將(jiang)管轉(zhuan)移到冰(bing)浴中(zhong)，使細胞冷(leng)卻2-3 分鐘(zhong)，該過程不要(yao)搖動離心(xin)管。
4 向(xiang)每個(ge)離心管中(zhong)加入(ru)900 μl 無菌的(de)SOC 或LB 培養基（不含抗(kang)生(sheng)素(su)）， 混勻後置於37℃搖床振(zhen)蕩培養1 小時(shi)（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)），目(mu)的是(shi)使質粒上相關(guan)的抗性(xing)標(biao)記(ji)基(ji)因表(biao)達(da)，使菌體復蘇。
AH109 感受(shou)態(tai)細胞100ul*105 將(jiang)離心(xin)管內容物混勻，吸取(qu)100 μl 已轉(zhuan)化(hua)的感受(shou)態(tai)細胞加到含相應(ying)抗生素(su)的(de)SOB 或LB 固(gu)體(ti)瓊脂培養基上(shang)，用(yong)無菌的(de)彎頭(tou)玻(bo)棒輕輕的(de)將(jiang)細胞均(jun)勻塗開。將(jiang)平(ping)板置於室(shi)溫(wen)直(zhi)至(zhi)液(ye)體被(bei)吸(xi)收(shou)，倒(dao)置平(ping)板，37℃培養12-16 小時(shi)。
●  塗布(bu)用(yong)量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)具(ju)體(ti)實驗(yan)來調(tiao)整(zheng)。如轉(zhuan)化(hua)的DNA 總量(liang)較多，可(ke)取更少量(liang)轉(zhuan)化(hua)產物塗布(bu)平(ping)板；反之(zhi)，如轉(zhuan)化(hua)的DNA 總量(liang)較少，可(ke)取200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產物塗布(bu)平(ping)板。如果預(yu)計的(de)克(ke)隆(long)較少，可(ke)通過離心(xin)（4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong)）後吸(xi)除(chu)部(bu)分培養液，懸(xuan)浮(fu)菌體(ti)後(hou)將(jiang)其塗布(bu)於(yu)壹個(ge)平(ping)板中(zhong)。（塗布(bu)剩(sheng)余(yu)的菌(jun)液可(ke)置於4℃保(bao)存，如果次日的(de)轉(zhuan)化(hua)菌落(luo)數過少可(ke)以將(jiang)剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液(ye)再塗布(bu)新(xin)的培養板）
 註(zhu)意事(shi)項(xiang)
1. 感受(shou)態(tai)細胞應(ying)保(bao)存在 -70℃，不可(ke)多次凍(dong)融和放置時間(jian)過長，以避免降(jiang)低(di)感受(shou)態(tai)細胞的(de)轉(zhuan)化(hua)效率(lv)。
2. 進(jin)行(xing)轉(zhuan)化(hua)操(cao)作時(shi)，應(ying)根據(ju)相應(ying)溫(wen)度(du)及無菌條(tiao)件的(de)要(yao)求(qiu)進行(xing)。
3 為防(fang)止轉(zhuan)化(hua)實驗(yan)不成(cheng)功，可(ke)以保(bao)留部(bu)分連(lian)接反應(ying)液，以重(zhong)新(xin)轉(zhuan)化(hua)，將(jiang)損失(shi)降(jiang)到(dao)低(di)。
以下(xia)是(shi)的相關(guan)產品：

 MGP 人基質γ羧(suo)基(ji)蛋白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 lumican 人基(ji)膜聚糖(tang) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MSTN 人肌抑素(su) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 dystrophin 人肌養蛋白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MYOG 人肌細胞生(sheng)成(cheng)素 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 CK-MB 人肌酸(suan)激(ji)酶同(tong)工(gong)酶MB 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 CK-MB 人肌酸(suan)激(ji)酶同(tong)工(gong)酶MB 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 CK 人肌酸(suan)激(ji)酶 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MHC 人肌球蛋(dan)白(bai)重(zhong)鏈(lian) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MLCK 人肌球蛋(dan)白(bai)輕(qing)鏈激(ji)酶 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MLC 人肌球蛋(dan)白(bai)輕(qing)鏈 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 Myosin 人肌球蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 TN-R 人肌腱蛋(dan)白(bai)R 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 TN-R 人肌腱蛋(dan)白(bai)R 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MYO/MB 人肌紅蛋白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MYO/MB 人肌紅蛋白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 Tn-Ⅰ 人肌鈣蛋(dan)白(bai)Ⅰ 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 FⅫa 人活化(hua)Ⅻ 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 APCR 人活化(hua)蛋白(bai)C抵(di)抗(kang)素(su) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 APC 人活化(hua)蛋白(bai)C 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 LHRH 人黃(huang)體(ti)生(sheng)成素釋放激(ji)素 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 cAMP 人 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 cGMP 人環(huan)磷(lin)酸(suan)鳥(niao)苷(gan) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 COX-2 人環(huan)加氧酶2 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 CsA 人A 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 talin 人踝(huai)蛋白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 ALOX-5 人花(hua)生(sheng)四烯(xi)酸(suan)5脂加氧酶 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 AA 人花(hua)生(sheng)四烯(xi)酸(suan) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 EPOR 人紅細胞生(sheng)成(cheng)素受體(ti) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 EPO 人紅細胞生(sheng)成(cheng)素 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 EMP 人紅細胞膜蛋白(bai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 ESF 人紅細胞刺激(ji)因子(zi) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 sm Actinin-α  人橫(heng)紋肌輔肌動蛋白(bai)α  規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MLZE 人黑(hei)素(su)瘤衍(yan)生(sheng)拉鏈(lian)額外(wai)核(he)因子(zi) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MC Ab 人黑(hei)色(se)素(su)細胞抗(kang)體(ti) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MSH 人黑(hei)色(se)素(su)細胞刺激(ji)素 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MMSAM 人黑(hei)色(se)素(su)瘤轉(zhuan)移表面黏附(fu)分子(zi) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 AH109 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10MAGE 人(ren)黑(hei)色(se)素(su)瘤相關(guan)抗原(yuan) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MAGE 人黑(hei)色(se)素(su)瘤相關(guan)抗原(yuan) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 MART/Melan-A 人黑(hei)色(se)素(su)瘤標(biao)記(ji)物(wu) 規(gui)格(ge)： 48T/96T

 NF-κB p65 人核(he)因子(zi)-κB亞(ya)基(ji)p65親和肽(tai) 規(gui)格(ge)： 48T/96T