更新(xin)時(shi)間(jian):2025-11-29
C58C1 電(dian)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*10菌株(zhu)壹(yi)種常(chang)用於(yu)質(zhi)粒克(ke)隆(long)的菌株(zhu)。其(qi)φ80lacZΔM15基因的產物可(ke)與pUC載(zai)體(ti)編(bian)碼(ma)的b-半(ban)乳糖苷(gan)酶氨(an)基(ji)端(duan)實(shi)現(xian)a互補(bu),可用(yong)於(yu)藍白斑(ban)篩(shai)選。recA1和(he)endA1 的突(tu)變有(you)利於克(ke)隆(long)DNA 的穩定(ding)和(he)高純(chun)度質(zhi)粒DNA的(de)提取(qu)。
C58C1 電(dian)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*10操作(zuo)方(fang)法(fa)(以(yi)下(xia)操作(zuo)均按(an)無菌條(tiao)件的(de)標(biao)準(zhun)進行)
1 取(qu)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)置於(yu)冰(bing)浴(yu)中,如需(xu)分(fen)裝(zhuang)可(ke)將剛(gang)融化細(xi)胞(bao)懸液(ye)分(fen)裝(zhuang)到(dao)無菌預(yu)冷(leng)的離(li)心管(guan)中,置於(yu)冰浴(yu)中。
● 壹次(ci)轉化感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)的建議(yi)用(yong)量為50-100 μl,可以(yi)根(gen)據實(shi)際情(qing)況(kuang)分(fen)裝(zhuang)使用。應註(zhu)意(yi)所(suo)用DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要超(chao)過感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)懸液(ye)體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分(fen)之壹(yi)。
以(yi)下(xia)實(shi)驗以(yi)100 μl感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)為例。
C58C1 電感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*102 向感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)懸液(ye)中加入(ru)目(mu)的DNA(100 μl 的(de)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)能夠(gou)被1 ng 超(chao)螺旋(xuan)質(zhi)粒DNA 所(suo)飽和(he)),輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉(zhuan)離(li)心管(guan)以(yi)混(hun)勻(yun)內(nei)容(rong)物(wu),在(zai)冰(bing)浴中靜(jing)置30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將離(li)心管(guan)置(zhi)於(yu)42℃水浴(yu)中放置(zhi)60-90 秒,然(ran)後(hou)快速(su)將管(guan)轉(zhuan)移到(dao)冰浴中,使細(xi)胞(bao)冷(leng)卻2-3 分(fen)鐘(zhong),該(gai)過程(cheng)不(bu)要搖(yao)動(dong)離(li)心管(guan)。
4 向每個(ge)離(li)心管(guan)中加入(ru)900 μl 無菌的(de)SOC 或LB 培養(yang)基(ji)(不(bu)含抗生(sheng)素(su)), 混(hun)勻(yun)後(hou)置於(yu)37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩(dang)培養(yang)1 小(xiao)時(shi)(160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)),目(mu)的是使質粒上(shang)相關(guan)的(de)抗性標(biao)記基因(yin)表達(da),使菌體(ti)復(fu)蘇(su)。
C58C1 電感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*105 將離(li)心管(guan)內(nei)容(rong)物(wu)混(hun)勻(yun),吸取(qu)100 μl 已轉化的感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)加到(dao)含相應抗生(sheng)素(su)的(de)SOB 或(huo)LB 固(gu)體(ti)瓊(qiong)脂培養(yang)基(ji)上(shang),用(yong)無菌的(de)彎頭玻(bo)棒輕(qing)輕(qing)的將細(xi)胞(bao)均勻(yun)塗開(kai)。將平板(ban)置於(yu)室(shi)溫(wen)直(zhi)至(zhi)液(ye)體(ti)被吸收,倒置(zhi)平板(ban),37℃培養(yang)12-16 小(xiao)時(shi)。
● 塗布用(yong)量可(ke)根(gen)據具(ju)體(ti)實(shi)驗來調整(zheng)。如轉化的DNA 總(zong)量(liang)較多,可(ke)取(qu)更少(shao)量轉(zhuan)化產物塗布平(ping)板(ban);反之,如轉化的DNA 總(zong)量(liang)較少(shao),可取(qu)200-300 μl 轉化產物塗布平(ping)板(ban)。如果預計的克(ke)隆(long)較少(shao),可通(tong)過離(li)心(4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong))後(hou)吸除(chu)部分(fen)培養(yang)液(ye),懸浮(fu)菌(jun)體(ti)後(hou)將其(qi)塗布於(yu)壹個(ge)平(ping)板(ban)中。(塗布剩(sheng)余(yu)的(de)菌液(ye)可(ke)置於4℃保存,如果次日(ri)的轉(zhuan)化菌落(luo)數過少(shao)可以(yi)將剩下(xia)的(de)菌液(ye)再塗布新(xin)的培養(yang)板(ban))
註意(yi)事項(xiang)
1. 感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)應保存在 -70℃,不(bu)可(ke)多(duo)次(ci)凍融和(he)放置(zhi)時間(jian)過長(chang),以(yi)避(bi)免(mian)降(jiang)低感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)的轉(zhuan)化效率(lv)。
2. 進行轉化操作(zuo)時(shi),應根(gen)據相應溫(wen)度及(ji)無菌條(tiao)件的(de)要求進行。
3 為防止轉(zhuan)化實(shi)驗不(bu)成(cheng)功,可(ke)以(yi)保留部分(fen)連(lian)接(jie)反應液(ye),以(yi)重新轉化,將損失(shi)降(jiang)到(dao)低。
以(yi)下(xia)是的(de)相關(guan)產品:
ELISA Kit,48T/96T 規格(ge): 48T/96T
β-Lg 人β乳球蛋白 規格(ge): 48T/96T
β-OHB 人β羥丁(ding)酸(suan) 規格(ge): 48T/96T
βGD 人β葡(pu)萄糖醛酸(suan)苷(gan)酶 規格(ge): 48T/96T
β-glucosidase 人β葡(pu)糖苷酶 規格(ge): 48T/96T
β-naphthol 人β萘酚 規格(ge): 48T/96T
BLI 人β內(nei)酰(xian)胺(an)酶抑(yi)制劑(ji) 規格(ge): 48T/96T
β-lactamase 人β內(nei)酰(xian)胺(an)酶 規格(ge): 48T/96T
β-EPR 人β內(nei)啡肽(tai)受體(ti) 規格(ge): 48T/96T
β-EP 人β內(nei)啡肽(tai) 規格(ge): 48T/96T
β-Cat 人β連環(huan)蛋白/聯(lian)蛋白 規格(ge): 48T/96T
β Manase 人β甘露糖(tang)苷酶 規格(ge): 48T/96T
IFN-β/IFNB 人β幹(gan)擾(rao)素(su) 規格(ge): 48T/96T
Aβ1-42 人β澱(dian)粉樣(yang)蛋白1-42 規格(ge): 48T/96T
Aβ1-40 人β澱(dian)粉樣(yang)蛋白1-40 規格(ge): 48T/96T
β-LPH 人β-促脂素(su) 規格(ge): 48T/96T
βGAL 人β半乳糖苷(gan)酶 規格(ge): 48T/96T
β-hexosaminidase A 人β氨基己(ji)糖苷酶A 規格(ge): 48T/96T
integrin β2/CD11+CD18 人β2整(zheng)合(he)素(su) 規格(ge): 48T/96T
BMG/β2-MG 人β2微球蛋白 規格(ge): 48T/96T
β2-GP1 Ab IgM 人β2糖蛋白1抗體(ti)IgM 規格(ge): 48T/96T
β2-GP1 Ab IgG 人β2糖蛋白1抗體(ti)IgG 規格(ge): 48T/96T
β2-GP1 IgA/G/M 人β2糖蛋白1抗體(ti)IgA/G/M 規格(ge): 48T/96T
β2-GP1 Ab IgA 人β2糖蛋白1抗體(ti)IgA 規格(ge): 48T/96T
β2-GP 人β2糖蛋白 規格(ge): 48T/96T
α-enolase 人α烯(xi)醇化酶 規格(ge): 48T/96T
α-SYN 人α突(tu)觸核(he)蛋白 規格(ge): 48T/96T
α-La 人α乳清蛋白 規格(ge): 48T/96T
αHBDH 人α羥基(ji)丁(ding)酸脫(tuo)氫酶 規格(ge): 48T/96T
α-glucosidase 人α葡(pu)萄糖苷酶 規格(ge): 48T/96T
α-SMA 人α平滑(hua)肌肌動(dong)蛋白 規格(ge): 48T/96T
α-EP 人α-內(nei)*肽(tai) 規格(ge): 48T/96T
α Actin 人α肌動(dong)蛋白 規格(ge): 48T/96T
α-SCA 人α橫紋(wen)肌肌動(dong)蛋白 規格(ge): 48T/96T
α-GST 人α*S轉移酶 規格(ge): 48T/96T
α Manase 人α甘露糖(tang)苷酶 規格(ge): 48T/96T
C58C1 電(dian)感(gan)受態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*10
ACTN-3 人α-輔肌動(dong)蛋白3 規格(ge): 48T/96T
Gal 人α半乳糖基(ji)抗體(ti) 規格(ge): 48T/96T