Ar 1193 電感受態(tai)細胞50ul*10

Ar 1193 電感受態(tai)細胞50ul*10 操作(zuo)方法(fa)（以(yi)下(xia)操作(zuo)均按(an)無菌(jun)條(tiao)件的標準(zhun)進(jin)行）
1 取(qu)感受態(tai)細胞置(zhi)於冰浴中，如(ru)需分裝(zhuang)可(ke)將(jiang)剛融(rong)化(hua)細胞懸(xuan)液(ye)分裝(zhuang)到(dao)無菌(jun)預(yu)冷(leng)的離心(xin)管中，置(zhi)於冰浴中。
●  壹(yi)次(ci)轉(zhuan)化(hua)感受態(tai)細胞的建(jian)議(yi)用(yong)量為50-100 μl，可以(yi)根(gen)據(ju)實際情(qing)況(kuang)分裝(zhuang)使(shi)用(yong)。應註(zhu)意所用(yong)DNA 體積(ji)不要超(chao)過(guo)感受態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)體積(ji)的十(shi)分之(zhi)壹(yi)。
以(yi)下(xia)實驗以(yi)100 μl感受態(tai)細胞為例。
Ar 1193 電感受態(tai)細胞50ul*102 向感受態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)中加(jia)入目(mu)的DNA（100 μl 的感受態(tai)細胞能夠被(bei)1 ng 超(chao)螺旋(xuan)質粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuan)離心(xin)管以(yi)混勻(yun)內(nei)容物，在冰(bing)浴(yu)中靜置(zhi)30 分鐘。
3 將(jiang)離心(xin)管置(zhi)於42℃水浴(yu)中放置(zhi)60-90 秒(miao)，然後快速(su)將(jiang)管轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰(bing)浴(yu)中，使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘，該(gai)過(guo)程不(bu)要搖動(dong)離心(xin)管。
4 向每個離心(xin)管中加(jia)入900 μl 無菌(jun)的SOC 或LB 培養(yang)基（不含抗(kang)生(sheng)素）， 混勻(yun)後置(zhi)於37℃搖床振(zhen)蕩培養(yang)1 小(xiao)時（160-220 轉(zhuan)/分鐘），目(mu)的是(shi)使(shi)質粒(li)上(shang)相關(guan)的抗(kang)性(xing)標記基因表達，使(shi)菌(jun)體復蘇(su)。
Ar 1193 電感受態(tai)細胞50ul*105 將離心(xin)管內容物混勻(yun)，吸取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的感受態(tai)細胞加(jia)到含相應抗(kang)生素(su)的SOB 或LB 固(gu)體瓊(qiong)脂培養(yang)基上(shang)，用(yong)無菌(jun)的彎頭(tou)玻(bo)棒輕輕的將(jiang)細(xi)胞均(jun)勻塗(tu)開(kai)。將(jiang)平板(ban)置(zhi)於室(shi)溫直(zhi)至液(ye)體被(bei)吸收，倒置(zhi)平板(ban)，37℃培養(yang)12-16 小(xiao)時。
●  塗(tu)布(bu)用(yong)量可根(gen)據(ju)具體實(shi)驗來調整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量較多，可(ke)取更(geng)少(shao)量轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban)；反之，如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量較少(shao)，可取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban)。如(ru)果預(yu)計(ji)的克隆(long)較(jiao)少，可通(tong)過(guo)離心(xin)（4,000 rpm, 2分鐘）後吸除(chu)部分培養(yang)液(ye)，懸(xuan)浮菌(jun)體後將其塗(tu)布(bu)於(yu)壹(yi)個(ge)平(ping)板(ban)中。（塗(tu)布(bu)剩(sheng)余(yu)的菌(jun)液可(ke)置(zhi)於4℃保存(cun)，如(ru)果次(ci)日(ri)的轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落(luo)數(shu)過(guo)少可(ke)以(yi)將(jiang)剩(sheng)下(xia)的菌(jun)液再(zai)塗(tu)布(bu)新(xin)的培養(yang)板(ban)）
 註(zhu)意事(shi)項
1. 感受態(tai)細胞應保存(cun)在 -70℃，不(bu)可(ke)多次(ci)凍融(rong)和放置(zhi)時間過(guo)長(chang)，以(yi)避(bi)免降低(di)感受態(tai)細胞的轉(zhuan)化(hua)效率。
2. 進(jin)行轉(zhuan)化(hua)操作(zuo)時，應根(gen)據(ju)相應溫(wen)度及無菌(jun)條(tiao)件的要求(qiu)進(jin)行。
3 為防(fang)止(zhi)轉(zhuan)化(hua)實驗不(bu)成功，可(ke)以(yi)保留部分連(lian)接反應液(ye)，以(yi)重(zhong)新(xin)轉(zhuan)化(hua)，將損失(shi)降到(dao)低(di)。
以(yi)下(xia)是的相關(guan)產(chan)品(pin)：

 Thymosin α1 犬α1 規格： 48T/96T

 ICAM-1/CD54 犬細胞(bao)間粘(zhan)附(fu)分子(zi)1 規格： 48T/96T

 VK1 犬1 規格： 48T/96T

 VE 犬 規格： 48T/96T

 VA 犬 規格： 48T/96T

 DHT 犬雙(shuang)氫(qing)睪酮 規格： 48T/96T

 RBP 犬結合(he)蛋白(bai) 規格： 48T/96T

 Renin 犬腎素(su) 規格： 48T/96T

 ADM 犬腎上(shang)腺(xian)髓(sui)質(zhi)素(su) 規格： 48T/96T

 T3 犬*狀(zhuang)腺(xian)原(yuan)氨酸(suan) 規格： 48T/96T

 PSA 犬前(qian)列腺(xian)特異(yi)性抗(kang)原(yuan) 規格： 48T/96T

 eNOS 犬內皮(pi)型(xing)壹(yi)氧(yang)化(hua)氮(dan)合(he)成(cheng)酶 規格： 48T/96T

 ET-1 犬內皮(pi)素(su)1 規格： 48T/96T

 ET-1 犬內皮(pi)素(su)1 規格： 48T/96T

 IgE 犬免疫(yi)球蛋白(bai)E 規格： 48T/96T

 Des 犬結蛋白(bai) 規格： 48T/96T

 T4 犬甲狀(zhuang)腺(xian)素(su) 規格： 48T/96T

 MYO/MB 犬肌紅蛋白(bai) 規格： 48T/96T

 MYO/MB 犬肌紅蛋白(bai) 規格： 48T/96T

 Tn-Ⅰ 犬肌鈣蛋白(bai)Ⅰ 規格： 48T/96T

 EPO 犬紅細(xi)胞生(sheng)成(cheng)素(su) 規格： 48T/96T

 OPN 犬骨橋素 規格： 48T/96T

 T 犬睪酮 規格： 48T/96T

 HCⅡ 犬肝素(su)輔因子(zi)Ⅱ 規格： 48T/96T

 FSH 犬促(cu)卵(luan)泡(pao)素(su) 規格： 48T/96T

 LH 犬促(cu)黃(huang)體生(sheng)成激(ji)素 規格： 48T/96T

 E 犬雌(ci)激(ji)素 規格： 48T/96T

 E2 犬雌(ci)二(er)醇 規格： 48T/96T

 CD8 犬白細(xi)胞分化(hua)抗原(yuan)8 規格： 48T/96T

 CD6 犬白細(xi)胞分化(hua)抗原(yuan)6 規格： 48T/96T

 IL-6 犬白介(jie)素6 規格： 48T/96T

 IL-4 犬白介(jie)素4 規格： 48T/96T

 IL-2 犬白介(jie)素2 規格： 48T/96T

 IL-18 犬白介(jie)素18 規格： 48T/96T

 IFN-γ 犬γ幹(gan)擾(rao)素(su) 規格： 48T/96T

 GABA 犬γ氨基丁酸(suan) 規格： 48T/96T

 β-EP 犬β內啡(fei)肽 規格： 48T/96T

 IFN-α 犬α幹(gan)擾(rao)素(su) 規格： 48T/96T

 5-HT 犬5羥(qiang)色胺 規格： 48T/96T

 2,3-DPG 犬2,3-二(er)磷(lin)酸(suan)甘(gan)油酸(suan) 規格： 48T/96T

 AE 禽(qin)腦(nao)脊髓(sui)炎 規格： 48T/96T

 Ar 1193 電感受態(tai)細胞50ul*10MHC/BoLA 牛(niu)主(zhu)要組織相容(rong)性(xing)復合(he)體 規格： 48T/96T

 PROG 牛(niu)孕(yun)激(ji)素/孕(yun)酮 規格： 48T/96T

 ACAC 牛(niu)乙(yi)酰(xian)乙(yi)酸(suan)檢(jian)測(ce) 規格： 48T/96T