K599 電感受(shou)態(tai)細胞50ul*10

 K599 電感受(shou)態(tai)細胞50ul*10操(cao)作方(fang)法（以下(xia)操(cao)作均按無(wu)菌條(tiao)件(jian)的(de)標準(zhun)進行(xing)）
1 取感受(shou)態(tai)細胞置(zhi)於(yu)冰浴中，如需分裝可將(jiang)剛(gang)融化(hua)細胞懸液(ye)分裝到(dao)無(wu)菌預冷(leng)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中，置(zhi)於(yu)冰浴中。
●  壹次(ci)轉化(hua)感(gan)受(shou)態(tai)細胞的(de)建議(yi)用(yong)量(liang)為(wei)50-100 μl，可以根據(ju)實際情(qing)況分裝使(shi)用(yong)。應註意所用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要超(chao)過(guo)感(gan)受(shou)態(tai)細胞懸液(ye)體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分之(zhi)壹。
以(yi)下(xia)實驗(yan)以(yi)100 μl感受(shou)態(tai)細胞為(wei)例(li)。
 K599 電感受(shou)態(tai)細胞50ul*102 向感受(shou)態(tai)細胞懸液(ye)中加(jia)入目的(de)DNA（100 μl 的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細胞能(neng)夠(gou)被1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質(zhi)粒(li)DNA 所飽和），輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉離心(xin)管(guan)以(yi)混(hun)勻內(nei)容物(wu)，在(zai)冰浴中靜置(zhi)30 分鐘(zhong)。
3 將(jiang)離(li)心(xin)管(guan)置(zhi)於(yu)42℃水浴中放置(zhi)60-90 秒，然後(hou)快速(su)將(jiang)管(guan)轉移(yi)到(dao)冰浴中，使(shi)細胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘(zhong)，該(gai)過(guo)程(cheng)不(bu)要搖(yao)動(dong)離心(xin)管(guan)。
4 向(xiang)每個(ge)離(li)心(xin)管(guan)中加(jia)入900 μl 無(wu)菌的(de)SOC 或(huo)LB 培(pei)養(yang)基(ji)（不(bu)含(han)抗生(sheng)素）， 混(hun)勻後置(zhi)於(yu)37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩培養(yang)1 小(xiao)時(shi)（160-220 轉/分鐘(zhong)），目(mu)的(de)是(shi)使(shi)質(zhi)粒(li)上(shang)相關(guan)的(de)抗性(xing)標記基因(yin)表(biao)達，使(shi)菌體(ti)復蘇。
 K599 電感受(shou)態(tai)細胞50ul*105 將(jiang)離(li)心(xin)管(guan)內(nei)容物(wu)混勻，吸取100 μl 已轉化(hua)的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細胞加(jia)到(dao)含(han)相(xiang)應抗生(sheng)素的(de)SOB 或(huo)LB 固(gu)體(ti)瓊脂(zhi)培養(yang)基(ji)上(shang)，用(yong)無(wu)菌的(de)彎(wan)頭玻棒輕(qing)輕(qing)的(de)將(jiang)細胞均勻塗開。將(jiang)平(ping)板置(zhi)於(yu)室溫(wen)直(zhi)至液(ye)體(ti)被吸收，倒(dao)置(zhi)平(ping)板，37℃培(pei)養(yang)12-16 小(xiao)時(shi)。
●  塗布用(yong)量(liang)可根據(ju)具體(ti)實驗(yan)來調整。如轉化(hua)的(de)DNA 總量較多，可取更(geng)少(shao)量(liang)轉化(hua)產(chan)物塗布平(ping)板；反之(zhi)，如轉化(hua)的(de)DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉化(hua)產(chan)物塗布平(ping)板。如果預計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較少，可通過(guo)離(li)心(xin)（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）後(hou)吸除部(bu)分培(pei)養(yang)液(ye)，懸浮(fu)菌體(ti)後將(jiang)其(qi)塗布於壹(yi)個(ge)平(ping)板中。（塗布剩余(yu)的(de)菌液(ye)可置(zhi)於(yu)4℃保存，如果次日(ri)的(de)轉化(hua)菌落(luo)數過(guo)少(shao)可以將(jiang)剩(sheng)下(xia)的(de)菌液(ye)再塗布新的(de)培(pei)養(yang)板）
 註意事(shi)項
1. 感(gan)受(shou)態(tai)細胞應保(bao)存在(zai) -70℃，不(bu)可多次凍融(rong)和放(fang)置(zhi)時(shi)間過(guo)長(chang)，以避(bi)免(mian)降低感(gan)受(shou)態(tai)細胞的(de)轉化(hua)效(xiao)率。
2. 進行(xing)轉化(hua)操(cao)作時(shi)，應根據(ju)相應溫(wen)度(du)及無(wu)菌條(tiao)件(jian)的(de)要(yao)求進行(xing)。
3 為(wei)防(fang)止(zhi)轉化(hua)實驗(yan)不(bu)成功，可以保(bao)留(liu)部(bu)分連接(jie)反應液(ye)，以重(zhong)新(xin)轉化(hua)，將(jiang)損(sun)失(shi)降到(dao)低。
以下(xia)是(shi)的(de)相(xiang)關產(chan)品(pin)：

 BV 猴(hou)B病(bing)毒 規格(ge)： 48T/96T

 Lv/Vn 紅螯(ao)光(guang)殼螯蝦(xia)卵(luan)黃(huang)脂(zhi)磷蛋(dan)白(bai) 規格(ge)： 48T/96T

 MHC/RhLA 恒(heng)河猴(hou)主(zhu)要(yao)組(zu)織相(xiang)容性(xing)復合(he)體(ti) 規格(ge)： 48T/96T

 SCT 規格(ge)： 48T/96T

 C4 鮭魚(yu)補體(ti)蛋(dan)白(bai)4 規格(ge)： 48T/96T

 C3 鮭魚(yu)補體(ti)蛋(dan)白(bai)3 規格(ge)： 48T/96T

 Vtg 蝶(die)蛹(yong)金(jin)小蜂卵黃蛋(dan)白(bai)原(yuan) 規格(ge)： 48T/96T

 TF 大鼠(shu)組(zu)織因(yin)子 規格(ge)： 48T/96T

 t-PA 大鼠(shu)組(zu)織型纖(xian)溶(rong)酶(mei)原(yuan)激(ji)活(huo)劑 規格(ge)： 48T/96T

 TPA 大鼠(shu)組(zu)織多肽(tai)抗原(yuan) 規格(ge)： 48T/96T

 HD 大鼠(shu)組(zu)織蛋(dan)白(bai)去(qu)乙(yi)酰(xian)化(hua)酶(mei) 規格(ge)： 48T/96T

 cath-K 大鼠(shu)組(zu)織蛋(dan)白(bai)酶(mei)K 規格(ge)： 48T/96T

 histon-H2b 大鼠(shu)組(zu)蛋(dan)白(bai)H2b 規格(ge)： 48T/96T

 HIS 大鼠(shu)組(zu)胺(an) 規格(ge)： 48T/96T

 TBA 大鼠(shu)總膽(dan)汁(zhi)酸 規格(ge)： 48T/96T

 TFR/CD71 大鼠(shu)轉鐵蛋(dan)白(bai)受(shou)體(ti) 規格(ge)： 48T/96T

 TGFβ2 大鼠(shu)轉化(hua)生(sheng)長因(yin)子β2 規格(ge)： 48T/96T

 TGF-β1 大鼠(shu)轉化(hua)生(sheng)長因(yin)子β1 規格(ge)： 48T/96T

 TGF-α 大鼠(shu)轉化(hua)生(sheng)長因(yin)子α 規格(ge)： 48T/96T

 MHCⅢ/H-1Ⅲ 大鼠(shu)主(zhu)要(yao)組(zu)織相(xiang)容性(xing)復合(he)體(ti)Ⅲ類 規格(ge)： 48T/96T

 MHCⅡ/H-1Ⅱ 大鼠(shu)主(zhu)要(yao)組(zu)織相(xiang)容性(xing)復合(he)體(ti)Ⅱ類 規格(ge)： 48T/96T

 MHCⅠ/H-1Ⅰ 大鼠(shu)主(zhu)要(yao)組(zu)織相(xiang)容性(xing)復合(he)體(ti)Ⅰ類 規格(ge)： 48T/96T

 MBP 大鼠(shu)主(zhu)要(yao)堿性(xing)蛋(dan)白(bai) 規格(ge)： 48T/96T

 TSGF 大鼠(shu)腫瘤特異(yi)生(sheng)長因(yin)子/腫瘤相關(guan)因(yin)子 規格(ge)： 48T/96T

 TRAIL-R4 大鼠(shu)腫瘤壞死因(yin)子相(xiang)關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導(dao)配(pei)體(ti)4 規格(ge)： 48T/96T

 TRAIL-R3 大鼠(shu)腫瘤壞死因(yin)子相(xiang)關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導(dao)配(pei)體(ti)3 規格(ge)： 48T/96T

  K599 電感受(shou)態(tai)細胞50ul*10TRAIL-R1 大鼠(shu)腫瘤壞死因(yin)子相(xiang)關(guan)雕(diao)亡(wang)誘(you)導(dao)配(pei)體(ti)1 規格(ge)： 48T/96T

 TNFsR-Ⅱ 大鼠(shu)腫瘤壞死因(yin)子可溶(rong)性(xing)受(shou)體(ti)Ⅱ 規格(ge)： 48T/96T

 TNFsR-Ⅰ 大鼠(shu)腫瘤壞死因(yin)子可溶(rong)性(xing)受(shou)體(ti)Ⅰ 規格(ge)： 48T/96T

 TNF-β 大鼠(shu)腫瘤壞死因(yin)子β 規格(ge)： 48T/96T