EHA101 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10

EHA101 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10 操(cao)作(zuo)方(fang)法（以(yi)下(xia)操(cao)作(zuo)均(jun)按(an)無(wu)菌(jun)條(tiao)件的(de)標(biao)準(zhun)進行）
1 取感受(shou)態(tai)細胞置(zhi)於冰浴(yu)中(zhong)，如需分裝(zhuang)可(ke)將(jiang)剛(gang)融(rong)化細胞懸(xuan)液(ye)分裝(zhuang)到(dao)無(wu)菌(jun)預(yu)冷的(de)離(li)心管中(zhong)，置(zhi)於冰浴(yu)中(zhong)。
●  壹次(ci)轉(zhuan)化感受(shou)態(tai)細胞的(de)建議用量(liang)為50-100 μl，可(ke)以(yi)根據(ju)實際(ji)情況(kuang)分裝(zhuang)使用。應(ying)註(zhu)意所(suo)用DNA 體積不要(yao)超(chao)過感受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)體積的(de)十分之壹。
以(yi)下(xia)實驗以(yi)100 μl感受(shou)態(tai)細胞為(wei)例(li)。
2 向(xiang)感受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液(ye)中加(jia)入(ru)目(mu)的(de)DNA（100 μl 的(de)感受(shou)態(tai)細胞能(neng)夠(gou)被1 ng 超(chao)螺旋(xuan)質(zhi)粒DNA 所(suo)飽(bao)和），輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉(zhuan)離(li)心管以(yi)混(hun)勻(yun)內(nei)容(rong)物(wu)，在冰浴(yu)中(zhong)靜置30 分鐘(zhong)。
EHA101 感受(shou)態(tai)細胞100ul*103 將(jiang)離(li)心管置(zhi)於42℃水浴(yu)中(zhong)放置(zhi)60-90 秒(miao)，然後快(kuai)速將(jiang)管轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰(bing)浴(yu)中(zhong)，使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘(zhong)，該(gai)過程(cheng)不要(yao)搖(yao)動離(li)心管。
4 向(xiang)每個(ge)離(li)心管中(zhong)加(jia)入(ru)900 μl 無(wu)菌(jun)的(de)SOC 或LB 培(pei)養基（不含(han)抗生素）， 混(hun)勻(yun)後(hou)置於37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩(dang)培(pei)養1 小時（160-220 轉(zhuan)/分鐘(zhong)），目(mu)的(de)是使質粒(li)上(shang)相(xiang)關的(de)抗性標(biao)記基因表(biao)達(da)，使菌(jun)體(ti)復蘇(su)。
5 將(jiang)離(li)心管內(nei)容(rong)物(wu)混(hun)勻(yun)，吸(xi)取(qu)100 μl 已轉(zhuan)化的(de)感受(shou)態(tai)細胞加(jia)到(dao)含(han)相(xiang)應(ying)抗生素的(de)SOB 或LB 固(gu)體瓊脂(zhi)培(pei)養基上(shang)，用無菌(jun)的(de)彎(wan)頭玻棒輕(qing)輕(qing)的(de)將(jiang)細胞均(jun)勻(yun)塗開(kai)。將(jiang)平(ping)板置(zhi)於室(shi)溫直(zhi)至(zhi)液(ye)體(ti)被吸(xi)收(shou)，倒置(zhi)平(ping)板，37℃培(pei)養12-16 小時。
EHA101 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10●  塗布(bu)用量(liang)可根據(ju)具體實驗來(lai)調(tiao)整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較多(duo)，可(ke)取更少量(liang)轉化產物(wu)塗布(bu)平(ping)板；反(fan)之，如轉化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較少，可取200-300 μl 轉化產物(wu)塗布(bu)平(ping)板。如(ru)果(guo)預(yu)計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較少，可通過離(li)心（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）後吸(xi)除(chu)部分培(pei)養液，懸浮(fu)菌(jun)體(ti)後將(jiang)其(qi)塗布(bu)於壹個平(ping)板中(zhong)。（塗布(bu)剩(sheng)余(yu)的(de)菌(jun)液(ye)可置於4℃保存，如(ru)果(guo)次(ci)日(ri)的(de)轉化菌(jun)落(luo)數過少可以(yi)將(jiang)剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液(ye)再塗布(bu)新(xin)的(de)培養板）
 註(zhu)意事項(xiang)
1. 感受(shou)態(tai)細胞應(ying)保存在 -70℃，不可多(duo)次(ci)凍融(rong)和放置時間(jian)過長，以(yi)避免降低感受(shou)態(tai)細胞的(de)轉化效(xiao)率。
2. 進(jin)行轉化操(cao)作(zuo)時，應(ying)根據(ju)相(xiang)應(ying)溫度(du)及(ji)無菌(jun)條(tiao)件的(de)要求進行。
3 為防(fang)止轉(zhuan)化實驗不(bu)成功(gong)，可(ke)以(yi)保留(liu)部(bu)分連(lian)接反(fan)應(ying)液，以(yi)重新(xin)轉(zhuan)化，將(jiang)損失(shi)降(jiang)到(dao)低。
以(yi)下(xia)是的(de)相(xiang)關產品：

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