更新時間:2025-11-29
AGL1 感(gan)受態細胞100ul*100菌(jun)株壹種常(chang)用於(yu)質(zhi)粒克隆的菌株(zhu)。其φ80lacZΔM15基(ji)因(yin)的(de)產(chan)物可與pUC載(zai)體(ti)編碼的(de)b-半(ban)乳糖(tang)苷(gan)酶氨(an)基(ji)端(duan)實(shi)現(xian)a互補(bu),可用於(yu)藍白(bai)斑篩(shai)選。recA1和(he)endA1 的(de)突變有(you)利於(yu)克隆DNA 的穩(wen)定(ding)和高(gao)純度(du)質(zhi)粒DNA的(de)提取(qu)。
AGL1 感(gan)受態細胞100ul*100 操(cao)作方法(以下操(cao)作均(jun)按(an)無菌條件的(de)標準(zhun)進行)
1 取(qu)感(gan)受態細胞置(zhi)於冰(bing)浴(yu)中(zhong),如(ru)需分裝可(ke)將(jiang)剛(gang)融(rong)化(hua)細胞懸液分裝到(dao)無菌(jun)預冷(leng)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong),置(zhi)於(yu)冰(bing)浴(yu)中(zhong)。
● 壹(yi)次(ci)轉(zhuan)化感(gan)受態細胞的(de)建議用量(liang)為(wei)50-100 μl,可以根據(ju)實際情(qing)況(kuang)分裝使(shi)用。應(ying)註(zhu)意所(suo)用DNA 體(ti)積不(bu)要(yao)超(chao)過感(gan)受態細胞懸液體(ti)積的十分之壹(yi)。
以下實(shi)驗以100 μl感(gan)受態細胞為(wei)例。
AGL1 感(gan)受態細胞100ul*1002 向(xiang)感(gan)受態細胞懸液中(zhong)加(jia)入(ru)目(mu)的(de)DNA(100 μl 的感(gan)受態細胞能(neng)夠被(bei)1 ng 超(chao)螺旋(xuan)質(zhi)粒DNA 所(suo)飽和),輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉離(li)心管(guan)以混(hun)勻內(nei)容物,在(zai)冰(bing)浴(yu)中(zhong)靜(jing)置30 分鐘。
3 將(jiang)離(li)心管(guan)置(zhi)於42℃水浴中(zhong)放(fang)置(zhi)60-90 秒,然(ran)後(hou)快速(su)將管(guan)轉(zhuan)移到(dao)冰(bing)浴(yu)中(zhong),使(shi)細胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘,該(gai)過程(cheng)不(bu)要(yao)搖(yao)動離心管(guan)。
4 向(xiang)每個離心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru)900 μl 無(wu)菌(jun)的SOC 或LB 培養(yang)基(不(bu)含(han)抗生(sheng)素), 混(hun)勻後(hou)置(zhi)於(yu)37℃搖(yao)床(chuang)振蕩培養(yang)1 小時(shi)(160-220 轉/分鐘),目(mu)的(de)是使質(zhi)粒上(shang)相(xiang)關(guan)的抗性標(biao)記(ji)基因(yin)表(biao)達(da),使菌(jun)體(ti)復(fu)蘇。
AGL1 感(gan)受態細胞100ul*1005 將(jiang)離心管(guan)內(nei)容物混(hun)勻,吸(xi)取(qu)100 μl 已(yi)轉化(hua)的(de)感(gan)受態細胞加(jia)到(dao)含相(xiang)應(ying)抗生(sheng)素的SOB 或(huo)LB 固體(ti)瓊(qiong)脂(zhi)培養(yang)基上(shang),用無(wu)菌(jun)的彎頭玻(bo)棒(bang)輕(qing)輕的(de)將細胞均(jun)勻(yun)塗開。將平板(ban)置(zhi)於(yu)室(shi)溫(wen)直(zhi)至液體(ti)被(bei)吸(xi)收,倒(dao)置(zhi)平板(ban),37℃培養(yang)12-16 小時(shi)。
● 塗布(bu)用量(liang)可根據(ju)具體(ti)實驗來(lai)調整(zheng)。如(ru)轉化(hua)的DNA 總(zong)量(liang)較多,可取(qu)更少量(liang)轉化產(chan)物塗布(bu)平板(ban);反(fan)之(zhi),如(ru)轉化(hua)的DNA 總(zong)量(liang)較少,可(ke)取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗布(bu)平板(ban)。如(ru)果預(yu)計的克隆較少,可(ke)通過離(li)心(xin)(4,000 rpm, 2分鐘)後(hou)吸(xi)除部分培養(yang)液,懸浮(fu)菌(jun)體(ti)後將其(qi)塗布(bu)於(yu)壹個平板(ban)中(zhong)。(塗布(bu)剩(sheng)余的菌(jun)液可置(zhi)於4℃保(bao)存(cun),如(ru)果次(ci)日的轉化菌落(luo)數(shu)過少可(ke)以將剩(sheng)下的(de)菌液再塗布(bu)新(xin)的培養(yang)板)
註(zhu)意事項(xiang)
1. 感(gan)受態細胞應(ying)保(bao)存(cun)在(zai) -70℃,不(bu)可(ke)多(duo)次(ci)凍融和放(fang)置(zhi)時(shi)間過長(chang),以避(bi)免降(jiang)低感(gan)受態細胞的(de)轉化效率。
2. 進行轉(zhuan)化操作時,應(ying)根據(ju)相(xiang)應(ying)溫(wen)度(du)及(ji)無(wu)菌條件的(de)要(yao)求(qiu)進行。
3 為(wei)防(fang)止轉化(hua)實驗不(bu)成(cheng)功,可以保(bao)留部分連接反應(ying)液,以重(zhong)新轉化,將損失降(jiang)到(dao)低。
以下是(shi)的相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin):
小鼠上(shang)皮(pi)中(zhong)性(xing)粒(li)細胞活(huo)化(hua)肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠上(shang)皮(pi)中(zhong)性(xing)粒(li)細胞活(huo)化(hua)肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠主(zhu)要(yao)組(zu)織(zhi)相(xiang)容性復(fu)合(he)體(ti)Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠主(zhu)要(yao)組(zu)織(zhi)相(xiang)容性復(fu)合(he)體(ti)Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠主(zhu)要(yao)組(zu)織(zhi)相(xiang)容性復(fu)合(he)體(ti)Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠結(jie)蛋(dan)白(bai)(Des)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Desmin,Des ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠結(jie)蛋(dan)白(bai)(Des)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠結(jie)蛋(dan)白(bai)(Des)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠肌(ji)球蛋(dan)白(bai)(Myosin)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Myosin ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠肌(ji)球蛋(dan)白(bai)(Myosin)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠肌(ji)球蛋(dan)白(bai)(Myosin)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠橫(heng)紋肌(ji)輔(fu)肌(ji)動(dong)蛋(dan)白(bai)α (sm Actinin-α)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠橫(heng)紋肌(ji)輔(fu)肌(ji)動(dong)蛋(dan)白(bai)α (sm Actinin-α)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠橫(heng)紋肌(ji)輔(fu)肌(ji)動(dong)蛋(dan)白(bai)α (sm Actinin-α)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠血(xue)纖(xian)蛋白(bai)原(Fbg)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Fibrinogen,Fbg ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠血(xue)纖(xian)蛋白(bai)原(Fbg)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠血(xue)纖(xian)蛋白(bai)原(Fbg)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠(SS)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Somatostatin,SS ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠(SS)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠(SS)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
小鼠胃(wei)動(dong)素(MTL)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Motilin,MTL ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠胃(wei)動(dong)素(MTL)ELISA試劑(ji)盒廠家 小鼠胃(wei)動(dong)素(MTL)ELISA試劑(ji)盒報價(jia)
AGL1 感(gan)受態細胞100ul*100 小鼠降(jiang)鈣素基因(yin)相(xiang)關(guan)肽(CGRP)ELISA試劑(ji)盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒保(bao)證(zheng)質(zhi)量(liang),靈(ling)敏性高(gao)、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等優(you)點已(yi)經得到(dao)廣大(da)客(ke)戶的(de)認可,您可(ke)放(fang)心(xin),且(qie)我(wo)司(si)有(you)專門的售(shou)後(hou)部門對您進行全線(xian)跟(gen)蹤。 :規(gui)格; 96T/48T