EHA105（pSoup） 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10​

EHA105（pSoup） 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10​ 操(cao)作(zuo)方法(fa)（以(yi)下操(cao)作均(jun)按無菌條(tiao)件的標準進行(xing)）
1 取(qu)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞置(zhi)於冰浴中(zhong)，如需分裝可(ke)將(jiang)剛(gang)融(rong)化(hua)細胞懸(xuan)液(ye)分裝到無菌預冷的離心管中(zhong)，置(zhi)於冰浴中(zhong)。
●  壹(yi)次(ci)轉化(hua)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞的建議用量為(wei)50-100 μl，可(ke)以(yi)根據(ju)實(shi)際(ji)情況分裝使用。應(ying)註(zhu)意(yi)所(suo)用DNA 體(ti)積不要(yao)超(chao)過感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)體(ti)積的十(shi)分之壹(yi)。
以(yi)下實(shi)驗以(yi)100 μl感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞為(wei)例(li)。
EHA105（pSoup） 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10​ 2 向(xiang)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)中(zhong)加入目的DNA（100 μl 的感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞能(neng)夠被1 ng 超(chao)螺(luo)旋質粒DNA 所(suo)飽(bao)和(he)），輕輕旋轉離(li)心管以(yi)混勻內容(rong)物(wu)，在冰浴中(zhong)靜(jing)置(zhi)30 分鐘(zhong)。
3 將離(li)心管置(zhi)於42℃水浴中(zhong)放(fang)置(zhi)60-90 秒(miao)，然後(hou)快(kuai)速(su)將管(guan)轉移(yi)到(dao)冰(bing)浴中(zhong)，使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分鐘(zhong)，該過程不要(yao)搖(yao)動離(li)心管。
4 向(xiang)每(mei)個(ge)離心管中(zhong)加入(ru)900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yang)基(ji)（不含抗生素(su)）， 混勻後置(zhi)於37℃搖(yao)床振(zhen)蕩培養1 小時(shi)（160-220 轉/分鐘(zhong)），目的是使質粒上(shang)相關(guan)的抗性(xing)標記基(ji)因表達(da)，使菌體復蘇(su)。
EHA105（pSoup） 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10​ 5 將(jiang)離(li)心管內容(rong)物(wu)混勻，吸取(qu)100 μl 已(yi)轉化(hua)的感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞加(jia)到(dao)含相(xiang)應(ying)抗生素(su)的SOB 或LB 固體(ti)瓊脂培養(yang)基(ji)上(shang)，用無菌的彎頭(tou)玻(bo)棒(bang)輕輕的將細胞均(jun)勻塗(tu)開(kai)。將平板(ban)置(zhi)於室溫(wen)直至液(ye)體(ti)被吸收，倒(dao)置(zhi)平板(ban)，37℃培養(yang)12-16 小(xiao)時(shi)。
●  塗(tu)布(bu)用量可(ke)根(gen)據具(ju)體實(shi)驗來調(tiao)整(zheng)。如轉化(hua)的DNA 總量較多，可(ke)取(qu)更少(shao)量轉化(hua)產(chan)物(wu)塗(tu)布(bu)平板(ban)；反之(zhi)，如轉化(hua)的DNA 總量較少(shao)，可(ke)取(qu)200-300 μl 轉化(hua)產(chan)物(wu)塗(tu)布(bu)平板(ban)。如果預計(ji)的克(ke)隆較少(shao)，可(ke)通(tong)過離(li)心（4,000 rpm, 2分鐘(zhong)）後吸(xi)除(chu)部(bu)分培養液(ye)，懸(xuan)浮(fu)菌體後(hou)將(jiang)其塗(tu)布(bu)於壹(yi)個(ge)平板(ban)中。（塗(tu)布(bu)剩余的菌液(ye)可(ke)置(zhi)於4℃保存，如果次(ci)日(ri)的轉化(hua)菌落數(shu)過少(shao)可(ke)以(yi)將剩下(xia)的菌液(ye)再(zai)塗(tu)布(bu)新的培養板(ban)）
 註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
1. 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞應(ying)保存在 -70℃，不可(ke)多次(ci)凍融(rong)和(he)放(fang)置(zhi)時(shi)間(jian)過長，以(yi)避免降(jiang)低(di)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞的轉化(hua)效率(lv)。
2. 進行(xing)轉化(hua)操作(zuo)時(shi)，應(ying)根據相(xiang)應(ying)溫度(du)及(ji)無菌條(tiao)件的要(yao)求(qiu)進行(xing)。
3 為(wei)防止(zhi)轉化(hua)實(shi)驗不成功，可(ke)以(yi)保留部(bu)分連接反應(ying)液(ye)，以(yi)重新轉化(hua)，將損(sun)失降(jiang)到(dao)低。
以(yi)下是的相關產(chan)品：

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EHA105（pSoup） 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞100ul*10​  小(xiao)鼠(shu)脂蛋(dan)白相關磷脂(zhi)酶(mei)A2(Lp-PL-A2)ELISA試(shi)劑盒 :英文名稱;   lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit 購買(mai)我公司(si)ELISA試劑(ji)盒保證(zheng)質(zhi)量，靈(ling)敏性(xing)高、特異性(xing)強、重復性(xing)好(hao)等優點(dian)已(yi)經(jing)得(de)到廣(guang)大客(ke)戶的認(ren)可(ke)，您可(ke)放(fang)心，且我司(si)有(you)專門(men)的售後(hou)部(bu)門(men)對您進行(xing)全(quan)線(xian)跟蹤。 :規(gui)格; 96T/48T 小鼠(shu)脂(zhi)蛋白(bai)相(xiang)關(guan)磷(lin)脂酶(mei)A2(Lp-PL-A2)ELISA試(shi)劑盒廠(chang)家(jia) 小鼠脂蛋白相關(guan)磷脂酶(mei)A2(Lp-PL-A2)ELISA試(shi)劑盒報(bao)價 

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