EHA105 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10

 EHA105 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10操(cao)作(zuo)方法（以下操(cao)作(zuo)均按(an)無菌(jun)條(tiao)件(jian)的(de)標(biao)準進(jin)行(xing)）
1 取(qu)感受(shou)態(tai)細胞置(zhi)於冰(bing)浴中，如需分(fen)裝可將(jiang)剛(gang)融化細胞懸(xuan)液分(fen)裝到(dao)無菌(jun)預(yu)冷(leng)的(de)離心(xin)管中，置(zhi)於冰(bing)浴中。
●  壹次(ci)轉(zhuan)化感受(shou)態(tai)細胞的(de)建(jian)議(yi)用量為50-100 μl，可以(yi)根據實(shi)際情(qing)況(kuang)分(fen)裝使(shi)用(yong)。應(ying)註(zhu)意所用(yong)DNA 體積(ji)不要超過(guo)感受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液體積(ji)的(de)十分(fen)之壹(yi)。
以(yi)下實(shi)驗以(yi)100 μl感受(shou)態(tai)細胞為(wei)例。
 EHA105 感受(shou)態(tai)細胞100ul*102 向(xiang)感受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液中加入(ru)目的(de)DNA（100 μl 的(de)感受(shou)態(tai)細胞能(neng)夠(gou)被1 ng 超螺旋質粒DNA 所飽(bao)和(he)），輕輕旋轉離心(xin)管以混勻(yun)內(nei)容(rong)物，在(zai)冰(bing)浴中靜置(zhi)30 分(fen)鐘。
3 將(jiang)離心(xin)管置(zhi)於42℃水(shui)浴中放置(zhi)60-90 秒，然(ran)後(hou)快速(su)將(jiang)管轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰(bing)浴中，使細胞冷(leng)卻2-3 分(fen)鐘，該(gai)過(guo)程不要搖(yao)動離心(xin)管。
4 向每個(ge)離心(xin)管中加入(ru)900 μl 無菌(jun)的(de)SOC 或LB 培(pei)養(yang)基（不含抗生素）， 混勻(yun)後(hou)置(zhi)於37℃搖床(chuang)振(zhen)蕩培(pei)養(yang)1 小時（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘），目(mu)的(de)是使質(zhi)粒(li)上相關的(de)抗性(xing)標(biao)記基因(yin)表(biao)達，使(shi)菌(jun)體復蘇(su)。
 EHA105 感受(shou)態(tai)細胞100ul*105 將(jiang)離心(xin)管內容(rong)物混勻(yun)，吸(xi)取(qu)100 μl 已轉(zhuan)化的(de)感受(shou)態(tai)細胞加到含相應抗(kang)生素的(de)SOB 或LB 固(gu)體瓊脂(zhi)培(pei)養(yang)基上，用(yong)無菌(jun)的(de)彎頭(tou)玻棒(bang)輕輕的(de)將(jiang)細胞均(jun)勻塗(tu)開。將(jiang)平板(ban)置(zhi)於室溫(wen)直至(zhi)液(ye)體被吸(xi)收(shou)，倒置(zhi)平(ping)板，37℃培(pei)養(yang)12-16 小時。
●  塗(tu)布(bu)用量(liang)可根據具(ju)體實(shi)驗來調(tiao)整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總量(liang)較多(duo)，可取(qu)更少量轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗布平(ping)板；反(fan)之(zhi)，如(ru)轉(zhuan)化的(de)DNA 總量(liang)較少，可取(qu)200-300 μl 轉化產(chan)物塗布平(ping)板。如(ru)果(guo)預計的(de)克(ke)隆較(jiao)少，可通(tong)過(guo)離心(xin)（4,000 rpm, 2分(fen)鐘）後(hou)吸除(chu)部(bu)分(fen)培養(yang)液，懸(xuan)浮菌(jun)體後(hou)將(jiang)其塗(tu)布於壹個(ge)平板(ban)中。（塗布剩(sheng)余(yu)的(de)菌(jun)液(ye)可置(zhi)於4℃保(bao)存，如(ru)果(guo)次(ci)日(ri)的(de)轉化(hua)菌(jun)落(luo)數(shu)過(guo)少可以(yi)將(jiang)剩(sheng)下的(de)菌(jun)液(ye)再塗布(bu)新的(de)培養(yang)板）
 註(zhu)意事項(xiang)
1. 感受(shou)態(tai)細胞應(ying)保(bao)存在(zai) -70℃，不可多(duo)次(ci)凍(dong)融和(he)放置(zhi)時間(jian)過(guo)長，以(yi)避(bi)免降(jiang)低(di)感受(shou)態(tai)細胞的(de)轉化(hua)效率。
2. 進(jin)行(xing)轉化操(cao)作(zuo)時，應(ying)根據相應溫(wen)度(du)及無菌(jun)條(tiao)件(jian)的(de)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
3 為防止轉(zhuan)化(hua)實(shi)驗不成功，可以(yi)保(bao)留部分(fen)連接(jie)反(fan)應(ying)液(ye)，以(yi)重(zhong)新轉(zhuan)化(hua)，將(jiang)損失降(jiang)到(dao)低(di)。
以下是的(de)相關產(chan)品(pin)：

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 小(xiao)鼠(shu)Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑(ji)盒(he) :英文名(ming)稱;   Fcoagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒(he)保(bao)證質(zhi)量(liang)，靈(ling)敏性高(gao)、特異性強、重(zhong)復性(xing)好(hao)等(deng)優點(dian)已經(jing)得到廣(guang)大(da)客戶(hu)的(de)認可，您可放心(xin)，且我(wo)司(si)有專(zhuan)門(men)的(de)售(shou)後(hou)部門(men)對(dui)您進(jin)行(xing)全線跟蹤。 :規格(ge); 96T/48T 小(xiao)鼠(shu)Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑(ji)盒(he)廠(chang)家 小(xiao)鼠(shu)Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑(ji)盒(he)報價 

 EHA105 感受(shou)態(tai)細胞100ul*10 小(xiao)鼠(shu)Ⅷ相關抗(kang)原(FⅧ-Ag)ELISA試劑(ji)盒(he) :英文名(ming)稱;   coagulation factor Ⅷ related antigen,FⅧ-Ag ELISA Kit 購買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑(ji)盒(he)保(bao)證質(zhi)量(liang)，靈(ling)敏性高(gao)、特異性強、重(zhong)復性(xing)好(hao)等(deng)優點(dian)已經(jing)得到廣(guang)大(da)客戶(hu)的(de)認可，您可放心(xin)，且我(wo)司(si)有專(zhuan)門(men)的(de)售(shou)後(hou)部門(men)對(dui)您進(jin)行(xing)全線跟蹤。 :規格(ge); 96T/48T 小(xiao)鼠(shu)Ⅷ相關抗(kang)原(FⅧ-Ag)ELISA試劑(ji)盒(he)廠(chang)家 小(xiao)鼠(shu)Ⅷ相關抗(kang)原(FⅧ-Ag)ELISA試劑(ji)盒(he)報價 

強(qiang)、重(zhong)復性(xing)好(hao)等(deng)優點(dian)已經(jing)得