JM109（DE3） 感受態(tai)細胞(bao)100ul*10

JM109(DE3) 感受態(tai)細胞(bao)100ul*10以下(xia)是(shi)的(de)訂(ding)購信(xin)息儲(chu)存條件(jian)：-70℃凍(dong)存
操(cao)作(zuo)方(fang)法:
1. 取-80℃保(bao)存的(de)農桿菌感(gan)受態(tai)於(yu)室溫或(huo)手(shou)心(xin)片刻(ke)待(dai)其部(bu)分融(rong)化(hua)，處(chu)於(yu)冰(bing)水(shui)混(hun)合(he)狀(zhuang)態(tai)時插入冰(bing)中(zhong)。
2.每100 μl感受態(tai)加(jia)入0.01-1 μg質(zhi)粒(li)DNA（轉化(hua)效率較(jiao)高，*次使(shi)用前做預實驗(yan)確(que)定所(suo)加(jia)質(zhi)粒(li)的量(liang)），用(yong)手(shou)管底(di)混(hun)勻(yun)，依(yi)次於(yu)冰(bing)上(shang)靜置5分鐘(zhong)、液(ye)氮5分鐘(zhong)、37℃水浴5分鐘(zhong)、冰(bing)浴5分鐘(zhong)。
JM109(DE3) 感受態(tai)細胞(bao)100ul*103. 加(jia)入700 μl無抗(kang)生素(su)的LB或(huo)YEB液(ye)體培(pei)養基(ji)，於28℃振(zhen)蕩培養2~3小時。
4. 6000 rpm離(li)心(xin)壹分鐘(zhong)收菌(jun)，留(liu)取100 μl左右上(shang)清(qing)輕輕吹(chui)打重懸(xuan)菌(jun)塊(kuai)塗(tu)布於含(han)相應(ying)抗(kang)生素(su)的LB或(huo)YEB平(ping)板上(shang)，倒(dao)置放於28℃培養箱培養2-3天
註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
1. 加(jia)入質(zhi)粒(li)時體(ti)積(ji)不應(ying)大(da)於(yu)感(gan)受態(tai)體(ti)積的(de)1/10；質(zhi)粒(li)不純(chun)或(huo)存在(zai)乙(yi)醇(chun)等有機(ji)物(wu)汙染，轉(zhuan)化(hua)效率急(ji)劇下(xia)降(jiang)；質(zhi)粒(li)增大壹倍，轉化(hua)效率下(xia)降(jiang)壹個數量級。
JM109(DE3) 感(gan)受態(tai)細胞(bao)100ul*102. 混(hun)入質(zhi)粒(li)時應(ying)輕柔(rou)操(cao)作(zuo)。轉(zhuan)化(hua)高濃度(du)的(de)質(zhi)粒(li)可相應(ying)減(jian)少終(zhong)用(yong)於塗(tu)板的(de)菌(jun)量(liang)。
3. 平板上(shang)陽(yang)性克隆密度過(guo)大(da)時(shi)，由(you)於營(ying)養不足(zu)，陽(yang)性克隆生(sheng)長變慢，菌(jun)落(luo)變小，為了(le)獲得大(da)的(de)菌(jun)落(luo)，應(ying)減(jian)少質(zhi)粒(li)用量(liang)。
4. 濃(nong)度(du)不應(ying)高於25 μg/ml，過(guo)高的濃(nong)度(du)不利(li)於(yu)農桿菌生(sheng)長，會降(jiang)低其(qi)生(sheng)長速度和(he)轉化(hua)效率。本(ben)公司感受態(tai)計(ji)算(suan)轉化(hua)效率時(shi)所用平板只含有(you)50 μg/ml kan，若(ruo)所(suo)用平板含(han)有(you)20 μg/ml rif則(ze)轉化(hua)效率降(jiang)低到1/2。
5. 培養基(ji)中加(jia)入的(de)目的是(shi)防止雜菌生(sheng)長、篩選(xuan)農桿菌；根(gen)據所用(yong)菌株抗(kang)性加(jia)入Ti質(zhi)粒(li)篩選(xuan)抗(kang)生素(su)可防止Ti質(zhi)粒(li)丟(diu)失(shi)，但(dan)Ti質(zhi)粒(li)篩選(xuan)抗(kang)生素(su)不利(li)於(yu)農桿菌的(de)轉(zhuan)基(ji)因操(cao)作，所以(yi)壹般(ban)培(pei)養農桿菌時(shi)不考(kao)慮(lv)這些(xie)抗(kang)生素(su)，Ti質(zhi)粒(li)丟(diu)失(shi)的(de)概(gai)率極(ji)低(可以(yi)忽(hu)略(lve))。

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