MG1655 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*10

MG1655 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*10操(cao)作(zuo)方法(fa)（以(yi)下(xia)操(cao)作(zuo)均按無(wu)菌條件的(de)標(biao)準(zhun)進行）
1 取(qu)感(gan)受(shou)態細胞(bao)置於(yu)冰浴(yu)中(zhong)，如需(xu)分(fen)裝可(ke)將(jiang)剛(gang)融化細胞(bao)懸液(ye)分(fen)裝到無(wu)菌預冷的(de)離(li)心管中，置(zhi)於(yu)冰浴(yu)中(zhong)。
●  壹次(ci)轉化(hua)感(gan)受(shou)態細胞(bao)的(de)建(jian)議(yi)用(yong)量為50-100 μl，可(ke)以根(gen)據實際情況(kuang)分(fen)裝使用。應(ying)註(zhu)意(yi)所(suo)用(yong)DNA 體(ti)積不(bu)要(yao)超過(guo)感(gan)受(shou)態細胞(bao)懸液(ye)體(ti)積的(de)十(shi)分(fen)之(zhi)壹(yi)。
以下(xia)實驗以(yi)100 μl感(gan)受(shou)態細胞(bao)為例(li)。
MG1655 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*102 向感(gan)受(shou)態細胞(bao)懸液(ye)中(zhong)加入目的(de)DNA（100 μl 的(de)感(gan)受(shou)態細胞(bao)能夠(gou)被(bei)1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質粒(li)DNA 所(suo)飽(bao)和(he)），輕輕旋轉離(li)心管以混勻內(nei)容(rong)物，在(zai)冰浴(yu)中(zhong)靜(jing)置(zhi)30 分(fen)鐘。
3 將(jiang)離(li)心管置於(yu)42℃水(shui)浴(yu)中放(fang)置(zhi)60-90 秒，然(ran)後(hou)快(kuai)速將管轉移(yi)到冰浴(yu)中(zhong)，使細胞(bao)冷卻2-3 分(fen)鐘，該(gai)過(guo)程(cheng)不(bu)要(yao)搖動離(li)心管。
4 向每個(ge)離(li)心管中加入900 μl 無(wu)菌的(de)SOC 或(huo)LB 培(pei)養基（不(bu)含(han)抗生素）， 混勻後(hou)置(zhi)於37℃搖床(chuang)振蕩培養1 小時（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘），目(mu)的(de)是(shi)使質粒(li)上相關的(de)抗性標(biao)記基(ji)因(yin)表達，使菌體(ti)復蘇(su)。
MG1655 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*105 將離(li)心管內容(rong)物混勻，吸取(qu)100 μl 已轉化(hua)的(de)感(gan)受(shou)態細胞(bao)加到含(han)相(xiang)應(ying)抗生素的(de)SOB 或(huo)LB 固體(ti)瓊(qiong)脂培(pei)養基上，用無(wu)菌的(de)彎(wan)頭玻(bo)棒輕輕的(de)將(jiang)細胞(bao)均勻塗開。將平板(ban)置(zhi)於(yu)室(shi)溫(wen)直(zhi)至液體(ti)被(bei)吸收，倒(dao)置(zhi)平(ping)板(ban)，37℃培(pei)養12-16 小時。
●  塗布用量可根(gen)據具體(ti)實驗來(lai)調整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)多(duo)，可取(qu)更(geng)少(shao)量(liang)轉(zhuan)化(hua)產物塗布平板；反(fan)之(zhi)，如(ru)轉化的(de)DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)少(shao)，可取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化產物塗布平板。如果(guo)預計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較(jiao)少，可通過(guo)離(li)心（4,000 rpm, 2分(fen)鐘）後(hou)吸除(chu)部(bu)分(fen)培養液，懸浮菌體(ti)後(hou)將(jiang)其(qi)塗布於壹個平板中(zhong)。（塗布剩(sheng)余的(de)菌(jun)液(ye)可(ke)置(zhi)於4℃保存(cun)，如果(guo)次(ci)日的(de)轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落(luo)數過(guo)少可(ke)以(yi)將(jiang)剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液(ye)再(zai)塗布新的(de)培(pei)養板）
註(zhu)意(yi)事項
1. 感(gan)受(shou)態細胞(bao)應保存(cun)在 -70℃，不(bu)可(ke)多次(ci)凍融和(he)放(fang)置(zhi)時(shi)間(jian)過(guo)長，以(yi)避(bi)免(mian)降低(di)感(gan)受(shou)態細胞(bao)的(de)轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)。
2. 進(jin)行轉化(hua)操(cao)作(zuo)時，應(ying)根(gen)據相應溫(wen)度及(ji)無(wu)菌條件的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)。
3 為防止(zhi)轉(zhuan)化(hua)實驗不(bu)成(cheng)功，可(ke)以保留(liu)部(bu)分(fen)連接(jie)反(fan)應(ying)液(ye)，以重(zhong)新轉(zhuan)化(hua)，將(jiang)損(sun)失降到低。
以(yi)下(xia)是(shi)的(de)相(xiang)關產品(pin)：

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MG1655 感(gan)受(shou)態細胞(bao)100ul*10 大(da)鼠纖(xian)溶(rong)酶抗纖溶(rong)酶復合(he)物(PAP)ELISA試(shi)劑(ji)盒 :英(ying)文名(ming)稱; Rat plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit 購買我(wo)公司ELISA試劑(ji)盒保證(zheng)質(zhi)量(liang)，靈(ling)敏性高(gao)、特(te)異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已經得(de)到廣大(da)客戶的(de)認(ren)可(ke)，您(nin)可(ke)放心，且我(wo)司(si)有專(zhuan)門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門對(dui)您進(jin)行(xing)全(quan)線(xian)跟蹤。 :規(gui)格(ge); 96T/48T 大(da)鼠纖(xian)溶(rong)酶抗纖溶(rong)酶復合(he)物(PAP)ELISA試(shi)劑(ji)盒廠(chang)家(jia) 大(da)鼠纖(xian)溶(rong)酶抗纖溶(rong)酶復合(he)物(PAP)ELISA試(shi)劑(ji)盒報(bao)價 

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