EPI400 感受(shou)態(tai)細胞(bao)100ul*50

EPI400 感受(shou)態(tai)細胞(bao)100ul*50操作(zuo)方(fang)法(fa)（以下操作(zuo)均按(an)無菌條(tiao)件的標(biao)準(zhun)進(jin)行）
1 取感受(shou)態(tai)細胞(bao)置於冰(bing)浴中(zhong)，如需分(fen)裝(zhuang)可將剛(gang)融(rong)化(hua)細胞(bao)懸液分(fen)裝(zhuang)到無菌預冷的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，置於冰(bing)浴中(zhong)。
EPI400 感受(shou)態(tai)細胞(bao)100ul*50●  壹次轉化(hua)感受(shou)態(tai)細胞(bao)的建(jian)議(yi)用量為50-100 μl，可以根據實際情況(kuang)分(fen)裝(zhuang)使(shi)用(yong)。應註(zhu)意所用(yong)DNA 體積(ji)不要(yao)超過(guo)感受(shou)態(tai)細胞(bao)懸液體積(ji)的十(shi)分(fen)之壹(yi)。
以下實驗(yan)以100 μl感受(shou)態(tai)細胞(bao)為例。
2 向感受(shou)態(tai)細胞(bao)懸液中(zhong)加入(ru)目的(de)DNA（100 μl 的(de)感受(shou)態(tai)細胞(bao)能夠被1 ng 超螺(luo)旋(xuan)質粒(li)DNA 所飽(bao)和(he)），輕輕旋(xuan)轉離(li)心(xin)管(guan)以混(hun)勻內容物，在(zai)冰浴中(zhong)靜(jing)置30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將(jiang)離(li)心(xin)管(guan)置於42℃水(shui)浴中(zhong)放置60-90 秒，然後快速將(jiang)管(guan)轉移(yi)到(dao)冰(bing)浴中(zhong)，使(shi)細胞(bao)冷卻2-3 分(fen)鐘(zhong)，該過(guo)程(cheng)不要(yao)搖(yao)動(dong)離(li)心(xin)管(guan)。
4 向每(mei)個(ge)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)加入(ru)900 μl 無菌的(de)SOC 或(huo)LB 培(pei)養(yang)基(ji)（不含(han)抗生素(su)）， 混勻後置於37℃搖(yao)床(chuang)振(zhen)蕩培養(yang)1 小時(shi)（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)），目的(de)是使(shi)質(zhi)粒上(shang)相(xiang)關的抗性標(biao)記基(ji)因表(biao)達(da)，使(shi)菌體復蘇。
EPI400 感受(shou)態(tai)細胞(bao)100ul*505 將離(li)心(xin)管(guan)內容物混勻，吸取100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的(de)感受(shou)態(tai)細胞(bao)加到含相(xiang)應抗(kang)生(sheng)素(su)的SOB 或(huo)LB 固(gu)體瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)上，用(yong)無菌的(de)彎(wan)頭(tou)玻(bo)棒輕(qing)輕的(de)將(jiang)細胞(bao)均勻塗開。將平板(ban)置於室(shi)溫直(zhi)至(zhi)液體被吸收(shou)，倒(dao)置平板(ban)，37℃培(pei)養(yang)12-16 小時(shi)。
●  塗(tu)布(bu)用量(liang)可根據具體實驗(yan)來(lai)調(tiao)整。如轉化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較多(duo)，可取更(geng)少量(liang)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗布(bu)平板(ban)；反(fan)之，如轉化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較少，可取200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗布(bu)平板(ban)。如果(guo)預計(ji)的克(ke)隆較少，可通過(guo)離(li)心(xin)（4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong)）後(hou)吸除(chu)部(bu)分(fen)培養(yang)液，懸(xuan)浮菌體後將其塗(tu)布(bu)於壹(yi)個(ge)平板(ban)中(zhong)。（塗布(bu)剩余(yu)的(de)菌液(ye)可置於4℃保存，如果(guo)次(ci)日的轉(zhuan)化(hua)菌落數過(guo)少可以將(jiang)剩下的菌液(ye)再(zai)塗布(bu)新的培養(yang)板）
註(zhu)意事(shi)項
1. 感受(shou)態(tai)細胞(bao)應保存在(zai) -70℃，不可多(duo)次凍(dong)融(rong)和(he)放置時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，以(yi)避(bi)免(mian)降低(di)感受(shou)態(tai)細胞(bao)的轉化(hua)效(xiao)率(lv)。
2. 進行轉化(hua)操(cao)作(zuo)時(shi)，應根據相(xiang)應溫度(du)及無菌條(tiao)件的要(yao)求進(jin)行。
3 為防止轉化(hua)實(shi)驗(yan)不成(cheng)功，可以保留(liu)部(bu)分(fen)連接反應液(ye)，以(yi)重(zhong)新轉化(hua)，將(jiang)損(sun)失降到低(di)。
以(yi)下是的相(xiang)關產(chan)品(pin)：

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