何首烏探針法(fa)PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)*

實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1. 整個檢測過程(cheng)應(ying)嚴(yan)格(ge)按照本說(shuo)明書(shu)要(yao)求分別(bie)在(zai)試劑(ji)準(zhun)備區、樣(yang)本處(chu)理(li)區和(he)PCR擴(kuo)增區進行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區實驗(yan)服、儀器(qi) 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用，不(bu)能(neng)混用；實(shi)驗(yan)用吸頭(tou)采用帶(dai)濾(lv)芯吸頭(tou)；樣(yang)本處(chu)理(li)區應(ying)配(pei)有(you)生物安全櫃，樣(yang)本處(chu)理(li)在(zai)生物安全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)；三個區應(ying)該(gai)配(pei)有(you)紫(zi)外(wai)線殺菌裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為避免RNA降解(jie)，樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實驗(yan)後立(li)即(ji)上機(ji)檢測；樣(yang)本處(chu)理(li)過(guo)程中(zhong)使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處(chu)理(li)。
3. 每(mei)次實驗(yan)應(ying)該(gai)設置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試劑(ji)盒(he)所有(you)試劑(ji)在(zai)使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫下充分融化混(hun)勻(yun)，並應(ying)瞬時離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內所配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性對照在(zai)壹(yi)次使(shi)用前(qian)應(ying)全部轉移(yi)至(zhi)標本準(zhun)備區，並單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為防止熒光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸手直(zhi)接接觸PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上進(jin)行任何標記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數應(ying)按(an)照(zhao)本說(shuo)明書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求進(jin)行(xing)設置；不(bu)同批(pi)號(hao)試劑(ji)不(bu)能(neng)混用。
8. ABI系列(lie)熒光定(ding)量PCR儀(yi)參數設置中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢(fei)棄(qi)物應(ying)該(gai)進(jin)行無(wu)害化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟棄。

特(te)點：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用，用戶(hu)只(zhi)需(xu)要(yao)提供病毒樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保守序(xu)列(lie)設計(ji)的(de)專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物，與相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反(fan)應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可以達到幾百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光定(ding)量 PCR 檢測，避免(mian)後續汙染。
5. 本試劑(ji)盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系的(de)熒光定(ding)量 PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適(shi)用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)。
使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與預培養(yang)按(an)照(zhao)樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與預培養(yang)按(an)照(zhao)《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生物學檢驗(yan)阪崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌檢驗(yan)要(yao)求進(jin)行(xing)。
2、血液樣(yang)品(pin)：用無(wu)菌註(zhu)射(she)器(qi)抽(chou)取受檢者靜脈(mai)血2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝(ning)管(guan)，立(li)即(ji)混勻(yun)。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便置於(yu)滅(mie)菌的(de)收集(ji)管(guan)中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈部位樣(yang)品(pin)：取發病部位新(xin)鮮滲出物、粘液(ye)膿血送檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度為例(li)）
1. 註(zhu)意：由於標準(zhun)品(pin)濃(nong)度非(fei)常高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀(xi)釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定要(yao)在(zai)獨立(li)的(de)區域進(jin)行(xing)，千萬(wan)不(bu)能(neng)汙染樣(yang)品(pin)或(huo)本試劑(ji)盒(he)的(de)其(qi)他(ta)成分）。為增加產品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)避(bi)免擴散(san)傳(chuan)染性(xing)病原(yuan)，本產品(pin)不(bu)提(ti)供活體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽性對照，只(zhi)提(ti)供可以直(zhi)接使(shi)用的(de) DNA段(duan)作為陽性對照。
2. 標記(ji) 6 個離心(xin)管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)分別(bie)加入(ru) 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板稀釋(shi)液（用帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(上步(bu)稀釋所得)，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
7. 重復(fu)上面(mian)的(de)操(cao)作(zuo)直(zhi)到得到 6 個稀釋(shi)度的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰(bing)上待(dai)用。
註(zhu)：上述(shu)樣(yang)品(pin)建議(yi)經(jing)過增菌後(hou)，收集(ji)培養(yang)物用於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液，按以下說明進(jin)行DNA核(he)酸的(de)粗(cu)提(ti)。也可采(cai)購(gou)上海(hai)澤葉生物科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公司(si)生產的(de)DNA提(ti)取試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒光配(pei)套(tao))或(huo)其他(ta)合(he)適的(de)商(shang)業化產品(pin)，並(bing)按(an)照(zhao)相(xiang)應(ying)試劑(ji)盒(he)說明進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培(pei)養(yang)物：取液體培養(yang)物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡(jin)量吸棄上清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物：挑取單克隆菌落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便樣(yang)品(pin)：挑取米粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便於滅(mie)菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
4、其(qi)他液(ye)體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性(xing)對照和(he)陰(yin)性(xing)對照為已經抽(chou)提好的(de)核(he)酸(無(wu)需(xu)提取)，直(zhi)接取5μL加(jia)入(ru)到反(fan)應(ying)體(ti)系中(zhong)即(ji)可。由於陽(yang)性(xing)對照濃(nong)度較高，建議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制備(bei)區域加(jia)入(ru)陽性對照。 
CM-R038大(da)鼠肝(gan)內(nei)膽(dan)管(guan)上皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL硫(liu)酸鋰(>98%,BR)Lithium sulfate質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR

Ca Ski, 人細(xi)胞 非(fei)洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎(shen)細(xi)胞,CV-1(M)細(xi)胞 PA-1(人卵(luan)巢畸胎(tai)瘤細(xi)胞)油(you)酸鈉(>98%,BR ) oleate質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR

小(xiao)鼠(shu)T細(xi)胞;Cl.Ly1+2-/9四甲基(ji)氯化銨(an)(>99%,BR)Tetramethylammonium chloride質(zhi)量規格(ge)：>99%,BR

NAALADL1 Others Human 人 NAALADL1 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 1-辛(xin)烷(wan)磺酸鈉(>98%,BC )1-Octanesulfonic acid,  salt質(zhi)量規格(ge)：>98%,BC

人細(xi)胞;Hela 229 [HeLa229]乙(yi)酸鈣(gai)壹(yi)水(shui)(>98%,BR)Calcium acetate, mohydrate質(zhi)量規格(ge)：>98%,BR
成(cheng)骨細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)醋(cu)酸潑(po)尼（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Prednisone Acetate

人皮膚鱗(lin)癌細(xi)胞;A-431 [A431] 大(da)鼠小(xiao)腸(chang)粘膜(mo)上皮(pi)細(xi)胞*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL普(pu)瑞巴(ba)林(lin)質量規格(ge)：>99%,S構(gou)型Pregabalin

DCS 小(xiao)鼠(shu)樹突狀細(xi)胞肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞鹽(yan)酸尼莫司(si)汀(ting)質(zhi)量規格(ge)：>97.0%,BR,可(ke)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)Nimustine HCl(ACNU)

EFNA2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) EFNA2 / Ephrin-A2 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) BEZ235 (Dactolisib)質(zhi)量規格(ge)：>98%;ATP競爭性PI3K和(he)mTOR抑制劑(ji)NVP-BEZ 235

大(da)鼠肝(gan)細(xi)胞瘤(liu);H4-II-E-C3吡嘧(mi)司(si)特(te)鉀質(zhi)量規格(ge)：>98%Pemirolast potassium
HCC38(人導(dao)管(guan)癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2新(xin)二(er)氫查爾(er)酮(標準(zhun)品(pin))質(zhi)量規格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品(pin)Neosperidin dihydrochalcone

hPC-PL Pellet 人胎(tai)盤周(zhou)細(xi)胞團(tuan)塊 > 1 mio.cells 人前列(lie)腺(xian)平滑肌細(xi)胞總RNAHPSMC NA氧(yang)化質(zhi)量規格(ge)：≥98%,BROxymatrine

CM-M066小(xiao)鼠(shu)膀(pang)胱成纖(xian)維(wei)細(xi)胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL1酸氫二(er)鈉七水(shui)質量規格(ge)：>98%,BR phosphate, dibasic, heptahydrate

PDK4 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) PDK4 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) dATP溶(rong)液(100 mM)質(zhi)量規格(ge)：>97%,BRdATP 100 mM solution

肺(fei)泡(pao)上皮(pi)細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)AEpiCM-prf癸酸鈉質量規格(ge)：>99%,進(jin)分 decaate
何首烏探針法(fa)PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)*IL32 Others Human 人 Ierleukin-32 / IL-32 (isoform alpha) 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) 1，3-（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規格(ge)：供檢查用1,3- Propylene Glycol

視網(wang)膜(mo)色(se)素(su)上皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)二(er)甘醇（標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量規格(ge)：供檢查用Diethylene Glycol

DDR2 Others Human 人 DDR2 Kinase / CD167b 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照) （標準(zhun)品(pin)）質(zhi)量
儲存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清：使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素(su)的(de)試管(guan)，操(cao)作(zuo)過程中(zhong)避(bi)免(mian)任何細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血液後，3000 轉離心(xin)10 分鐘將血清和(he)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞上清(qing)液：3000 轉離心(xin)10 分鐘去(qu)除顆粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組(zu)織勻(yun)漿：將組(zu)織加入(ru)適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000 轉離心(xin)10 分鐘取上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果(guo)樣(yang)本收集(ji)後不(bu)及時檢測，請按壹(yi)次用量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融，在(zai)室溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充分解(jie)凍(dong)。