更新時間:2025-11-29
TG1 感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*50菌(jun)株(zhu)壹種(zhong)常(chang)用(yong)於(yu)質粒(li)克(ke)隆的(de)菌(jun)株(zhu)。其φ80lacZΔM15基(ji)因的(de)產(chan)物可與(yu)pUC載(zai)體編碼(ma)的(de)b-半(ban)乳(ru)糖苷(gan)酶(mei)氨基(ji)端(duan)實現(xian)a互補(bu),可(ke)用(yong)於(yu)藍(lan)白斑篩(shai)選(xuan)。recA1和(he)endA1 的(de)突變有利(li)於(yu)克(ke)隆DNA 的(de)穩(wen)定(ding)和(he)高純(chun)度質粒(li)DNA的(de)提(ti)取(qu)。
TG1 感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*50操作方法(以下(xia)操作均按無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)的(de)標(biao)準(zhun)進行(xing))
1 取(qu)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)置於冰(bing)浴中(zhong),如(ru)需分(fen)裝(zhuang)可(ke)將剛(gang)融(rong)化(hua)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液分(fen)裝(zhuang)到(dao)無(wu)菌(jun)預(yu)冷的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong),置於冰(bing)浴中(zhong)。
● 壹次(ci)轉(zhuan)化(hua)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)的(de)建議(yi)用量為50-100 μl,可以根(gen)據實際情況分(fen)裝(zhuang)使(shi)用(yong)。應註(zhu)意(yi)所用DNA 體積不(bu)要超過(guo)感受(shou)態細(xi)胞(bao)懸(xuan)液體積的(de)十分(fen)之壹。
以(yi)下(xia)實驗以(yi)100 μl感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)為(wei)例。
TG1 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*502 向(xiang)感受(shou)態細(xi)胞(bao)懸(xuan)液中(zhong)加入目(mu)的(de)DNA(100 μl 的(de)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)被1 ng 超螺旋(xuan)質粒(li)DNA 所(suo)飽和(he)),輕(qing)輕旋(xuan)轉(zhuan)離心(xin)管(guan)以(yi)混勻內容(rong)物,在冰(bing)浴中(zhong)靜(jing)置30 分(fen)鐘。
3 將離心(xin)管(guan)置於42℃水浴中(zhong)放(fang)置60-90 秒,然後快(kuai)速將管(guan)轉(zhuan)移(yi)到冰浴中(zhong),使(shi)細(xi)胞(bao)冷(leng)卻2-3 分(fen)鐘,該過程(cheng)不(bu)要搖動(dong)離心(xin)管(guan)。
4 向(xiang)每個(ge)離心(xin)管(guan)中(zhong)加入900 μl 無(wu)菌(jun)的(de)SOC 或LB 培養基(ji)(不(bu)含抗生素), 混勻後(hou)置於37℃搖床振蕩(dang)培養1 小(xiao)時(160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘),目的(de)是使(shi)質粒(li)上(shang)相關(guan)的(de)抗性標(biao)記(ji)基(ji)因表達(da),使(shi)菌(jun)體復蘇。
TG1 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*505 將(jiang)離心(xin)管(guan)內容(rong)物混勻,吸(xi)取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的(de)感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)加到(dao)含相應抗生素的(de)SOB 或LB 固體瓊脂(zhi)培養基(ji)上(shang),用(yong)無(wu)菌(jun)的(de)彎頭玻(bo)棒輕(qing)輕(qing)的(de)將(jiang)細(xi)胞(bao)均勻塗(tu)開(kai)。將(jiang)平板置於室(shi)溫(wen)直至液體被吸(xi)收,倒置平板,37℃培養12-16 小(xiao)時。
● 塗(tu)布(bu)用(yong)量可根據具體實驗來調(tiao)整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較多,可取(qu)更少(shao)量轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板;反(fan)之,如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較少(shao),可(ke)取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)布(bu)平(ping)板。如果(guo)預計(ji)的(de)克(ke)隆較(jiao)少(shao),可(ke)通過(guo)離心(xin)(4,000 rpm, 2分(fen)鐘)後吸(xi)除部分(fen)培養液,懸浮菌(jun)體後將(jiang)其(qi)塗(tu)布(bu)於(yu)壹個(ge)平(ping)板中(zhong)。(塗(tu)布(bu)剩(sheng)余的(de)菌(jun)液可置於4℃保(bao)存(cun),如(ru)果(guo)次(ci)日(ri)的(de)轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落(luo)數過少(shao)可(ke)以將剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液再塗(tu)布(bu)新的(de)培養板)
註意(yi)事項
1. 感(gan)受(shou)態細(xi)胞(bao)應保(bao)存(cun)在 -70℃,不(bu)可(ke)多次(ci)凍融(rong)和(he)放(fang)置時間過長,以(yi)避免降(jiang)低(di)感受(shou)態細(xi)胞(bao)的(de)轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率。
2. 進行(xing)轉(zhuan)化(hua)操作時,應根(gen)據相應溫(wen)度及無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)的(de)要求進行(xing)。
3 為防止(zhi)轉(zhuan)化(hua)實驗不(bu)成(cheng)功(gong),可(ke)以(yi)保(bao)留部分(fen)連接(jie)反(fan)應液,以重新轉(zhuan)化(hua),將(jiang)損(sun)失(shi)降(jiang)到低(di)。
以下(xia)是的(de)相關(guan)產(chan)品(pin):
保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠信(xin)號轉(zhuan)導(dao)分(fen)子7(Smad7)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)信號轉(zhuan)導(dao)分(fen)子7(Smad7)ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)信號(hao)轉(zhuan)導(dao)分(fen)子(Smad1)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat signal transduction-Smad1 ELISA Kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠信(xin)號轉(zhuan)導(dao)分(fen)子(Smad1)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)信號轉(zhuan)導(dao)分(fen)子(Smad1)ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)淋巴細(xi)胞(bao)因子ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat lymphocyte factor ELISA Kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠淋(lin)巴細(xi)胞(bao)因子ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)淋巴細(xi)胞(bao)因子ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)磷酸(suan)化(hua)細(xi)胞(bao)外(wai)信號調(tiao)節(jie)激酶(mei)(pERK)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠磷酸(suan)化(hua)細(xi)胞(bao)外(wai)信號調(tiao)節(jie)激酶(mei)(pERK)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)磷酸(suan)化(hua)細(xi)胞(bao)外(wai)信號調(tiao)節(jie)激酶(mei)(pERK)ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)網膜(mo)素(su)(omentin)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat omentin ELISA Kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠網(wang)膜(mo)素(su)(omentin)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)網膜(mo)素(su)(omentin)ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)單核(he)細(xi)胞(bao)趨化(hua)蛋(dan)白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠單(dan)核細(xi)胞(bao)趨化(hua)蛋(dan)白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)單核細(xi)胞(bao)趨化(hua)蛋(dan)白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)轉(zhuan)化(hua)生(sheng)長(chang)因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat transforming growth factorsβ2,TGFβ2 ELISA Kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠轉(zhuan)化(hua)生(sheng)長(chang)因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)轉(zhuan)化(hua)生(sheng)長(chang)因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒報價(jia)
TG1 感受(shou)態細(xi)胞(bao)100ul*50 大(da)鼠β羥丁酸(suan)(βOHB)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu)的(de)認(ren)可(ke),您(nin)可(ke)放心(xin),且(qie)我司有專門的(de)售(shou)後(hou)部(bu)門(men)對(dui)您(nin)進行(xing)全線(xian)跟(gen)蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大(da)鼠β羥(qiang)丁酸(suan)(βOHB)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)β羥丁酸(suan)(βOHB)ELISA試劑盒報價(jia)
大鼠(shu)白介素(su)2受(shou)體(IL-2R)ELISA試劑盒 :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA kit 購(gou)買我(wo)公(gong)司ELISA試劑盒保(bao)證(zheng)質量,靈敏(min)性高、特異性強、重復性好(hao)等(deng)優點已經得(de)到(dao)廣大客(ke)戶(hu) :英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat ;