H4-II-E-C3 大(da)鼠肝癌(ai)細胞

公(gong)司產品僅供科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消化，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養箱(xiang)中培養；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用 PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察，待細胞回縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)終

止消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中進行(xing)長期(qi)保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒可直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞培養凍(dong)存處(chu)理(li)僅供參(can)考(kao)，具體操作(zuo)步驟(zhou)以隨貨產品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基混合均(jun)勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有細胞懸液加(jia)入含(han)適(shi)量培(pei)養基的(de)培養(yang)瓶中培養過夜(ye)（或將(jiang)細胞懸液加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基，培養過(guo)夜(ye)）。第二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所有細胞，將(jiang)培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終止消化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養。 3) 細胞凍(dong)存：待細胞生(sheng)長狀態(tai)良好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量加(jia)入無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌儲(chu)存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便下(xia)次拿(na)取。

三(san)、培養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好，培養(yang)液是(shi)否有漏液、渾濁等現象，若(ruo)有上(shang)述現象 發生(sheng)請(qing)及時(shi)和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如細胞形(xing)態、所用培養基、血清(qing)比(bi)例、所需 細胞因(yin)子等(deng)，確(que)保細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致而導致細胞(bao)出現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現象。觀(guan)察好細胞(bao)狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可以消化，懸浮細胞直(zhi)接混勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基重(zhong)懸 細胞，並(bing)接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件的(de)培養(yang)基用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張細胞照(zhao)片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和我(wo)司技術部溝通 交流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知細胞 的(de)具體情況(kuang)，以便我們的(de)技術人員(yuan)跟蹤回訪直(zhi)至問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培養(yang)基來培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹(yi)次傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司正在出售的(de)產品：

小(xiao)鼠肝外(wai)膽(dan)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)培(pei)養基 100mL 大(da)鼠配(pei)對(dui)框基因(yin)6(PAX6)ELISA試劑(ji)盒(he) BK(Mouse bradykinin)  小(xiao)鼠血管(guan)舒(shu)緩(huan)激(ji)肽 96T

NOR1： 神經元(yuan)衍生(sheng)孤(gu)兒受(shou)體1抗(kang)體 Hep 3B2.1-7細胞，肝癌(ai)細胞 人肝癌(ai)細胞,QGY-7703細胞 T-112B(含(han)100mL酶(mei)解緩(huan)沖液(ye))10mL

HA Others H12N1 甲(jia)型(xing)流(liu)感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠膀(pang)胱(guang)抗(kang)原(BTA)ELISA試劑(ji)盒(he) PI(Mouse Proinsulin)  小(xiao)鼠胰(yi)島(dao)素(su)原(yuan) 96T

Netrin 4： 軸突(tu)生(sheng)長誘向因(yin)子4抗(kang)體 胰島β細(xi)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

ATDC-5-EGFP[ATDC-5-pGC-FU-GFP](穩(wen)定株)小(xiao)鼠軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞 ATDC-5-EGFP[ATDC-5-pGC-FU-GFP] (stable sain) mice cartilage cells DMEM/F12(1：1)+10% FBS 大(da)鼠膀(pang)胱(guang)抗(kang)原(BTA)ELISA 試劑(ji)盒(he) MMSAM(Human melanoma metastasis surface adhesion molecule)  人黑(hei)色(se)素(su)瘤轉移表(biao)面(mian)黏附分子 96T

IFT80： 細(xi)胞(bao)纖(xian)毛(mao)內(nei)轉(zhuan)運(yun)同(tong)源蛋(dan)白(bai)80抗(kang)體 CNE1, 人鼻(bi)咽癌細(xi)胞(bao)系(xi)

EFNB1 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大(da)鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽) 犬(quan)白(bai)介(jie)素(su)18(IL-18)ELISA 試劑(ji)盒(he) 4-Oct 胚(pei)胎(tai)幹細胞(bao)關鍵(jian)蛋(dan)白(bai)(多(duo)肽) 0.5mg

CD101： CD101抗(kang)體 VEGFAA Others Danio rerio (zebrafish) 斑馬(ma)魚(yu) VEGF165 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照(zhao))

人皮下(xia)脂(zhi)肪細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 犬γ基(GABA)ELISA 試劑(ji)盒(he) OPN(osteopontin) 骨(gu)橋(qiao)蛋(dan)白(bai)(抗(kang)原) 0.5mg

IGSF5： 免(mian)疫球(qiu)蛋(dan)白(bai)超家(jia)族(zu)成(cheng)員(yuan)5抗(kang)體 MLF, 小(xiao)鼠淋巴(ba)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞 倉(cang)鼠(shu)beta胰(yi)島(dao)細(xi)胞(bao)，HIT-T15細(xi)胞(bao) CRFK(貓腎(shen)細(xi)胞)

H4-II-E-C3 大(da)鼠肝癌(ai)細胞髓核細(xi)胞(bao)培養基NPCM 大(da)鼠αL巖藻(zao)糖(tang)苷酶(mei)(AFU)ELISA 試劑(ji)盒(he) Ntn1(Human Netrin-1)  人軸突(tu)生(sheng)長誘向因(yin)子1 96T

RICTOR： 雷(lei)帕黴(mei)素(su)靶(ba)蛋(dan)白(bai)復合(he)體2抗(kang)體 A172(人腦(nao)膠質瘤細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2

EB病(bing)毒(du)轉化的(de)人B淋巴(ba)細胞(bao);KMY0909 人軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞培養基 100mL 大(da)鼠α2-纖(xian)溶(rong)酶(mei)抑制因(yin)子(α2PI)ELISA試劑(ji)盒(he) SFT(Human sulfatide)  人腦(nao)苷酯 96T

RelB： 核(he)轉(zhuan)錄因(yin)子NFKB-RelB蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 CL-0245Y1(Y-1) (小(xiao)鼠腎(shen)上(shang)腺皮質細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

細(xi)胞(bao) 大(da)鼠α2巨(ju)球(qiu)蛋(dan)白(bai)(α2-MG)ELISA試劑(ji)盒(he) REG-4(Human regenerating gene IV )  人再(zai)生(sheng)基因(yin)蛋(dan)白(bai)IV 96T