A172人膠質(zhi)母細胞瘤細胞

公(gong)司(si)產品(pin)僅供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用、不得用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

壹、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕輕吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加(jia)入培養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存。使(shi)用程序

降溫盒可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二、細胞培養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍存處理僅供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作步驟以隨貨產品(pin)說明(ming)書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含(han)適量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜）。第(di)二天換液(ye)並檢(jian)查細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸潤所有(you)細胞，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞大部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍存：待(dai)細胞生長(chang)狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據(ju)細胞數量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清細胞凍存液(ye)，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支凍存管(guan)凍存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意凍存管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取。

三、培養(yang)註意事項 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說明(ming)書(shu)，了解(jie)細胞相關信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形態(tai)、所用培養(yang)基、血(xue)清比例(li)、所需 細胞因(yin)子等(deng)，確保細胞培養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部分(fen)細胞由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎片，是(shi)正常現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並接種到新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用相同(tong)條件的(de)培養(yang)基用於(yu)細胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶(hu)收到細胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張細胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術部溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞會出(chu)現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術人員跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細胞僅供(gong)科研使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培養(yang)基) 不能再用來培養(yang)細胞，請換用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培 養(yang)條件新(xin)配制(zhi)的(de)培養(yang)基來培養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後(hou)第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

大鼠胃(wei)粘(zhan)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞培養(yang)基 100mL 大鼠腫(zhong)瘤壞死因(yin)子受(shou)體相關因(yin)子6(AF-6)ELISA試劑盒(he) BSA/FITC 熒(ying)光素(su)標(biao)記(ji)血(xue)清白蛋(dan)白 0.3ml

LAMA3： 層(ceng)粘(zhan)蛋(dan)白α3抗(kang)體(ti) PANC-1, 人胰腺癌(ai)細胞 肝(gan)癌(ai)細胞,Hep G2細胞 U-937(組織(zhi)細胞淋(lin)巴瘤(liu)細胞)

IGFBP1 Others Cynomolgus 食蟹(xie)猴(hou) IGFBP1 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) 大(da)鼠腫(zhong)瘤壞死因(yin)子受(shou)體超(chao)家族成(cheng)員5(TNFRSF5)ELISA試劑盒(he) BSA/RBITC 羅(luo)丹(dan)明(ming)標記(ji)血(xue)清白蛋(dan)白 0.3ml

LAMP1： 溶酶體相關膜蛋白1抗(kang)體(ti) 中國(guo)倉鼠卵(luan)巢細胞(亞系(xi)克(ke)隆);CHO Hu 164 SCF 17

Jurkat, Clone E6-1人T淋(lin)巴細胞白血(xue)病(bing)細胞 Jurkat, Clone and E6-1 in human T lymphocyte leukemia cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠腫(zhong)瘤壞死因(yin)子受(shou)體超(chao)家族成(cheng)員1B(TNFRSF1B)ELISA試劑盒(he) Dog IgM/RBITC 羅(luo)丹(dan)明(ming)標記(ji)狗(gou)IgM 0.3ml

肺大(da)靜(jing)脈平滑肌細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 人可溶性腺苷酸(suan)環化(hua)酶(sAC)ELISA 試劑盒(he) CD133 造(zao)血(xue)幹細胞抗(kang)原(yuan)(多肽(tai)抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

phospho-HSP70 (Tyr41)： 0酸(suan)化熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白-70抗(kang)體(ti) 家貓皮膚(fu)細胞;FCA-S1 胚(pei)肺成(cheng)纖(xian)維細胞，HFL-I細胞 IEC-6細胞，大鼠小(xiao)腸隱(yin)窩上(shang)皮(pi)細胞

IL23R Others Rat 大鼠 IL23R / IL23 Receptor 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) 人可溶性細胞因(yin)子受(shou)體(sCKR)ELISA 試劑盒(he) H5N1-H5 H5亞(ya)型(xing)全病(bing)毒 1mg

C19orf38： 19號染(ran)色(se)體開放閱(yue)讀(du)框(kuang)38抗(kang)體(ti) 原(yuan)代成(cheng)纖(xian)維細胞特(te)制(zhi)基礎(chu)無(wu)血(xue)清培養(yang)基Many types of cells包裝(zhuang)：500/100ml

Molt-4細胞，人T淋(lin)巴細胞(白血(xue)病(bing)CD8+) 小(xiao)鼠胰腺腺泡細胞癌細胞,MPC-83細胞 人尿道(dao)上(shang)皮(pi)細胞cDNAHUC cDNA 人可溶性細胞間(jian)粘(zhan)附(fu)分(fen)子(zi)1(sICAM-1)ELISA 試劑盒(he) Newcastle disease virus 雞(ji)新(xin)城疫疫(yi)苗(雞(ji)瘟4型(xing)混(hun)合病(bing)毒) 1ml

A172人膠質(zhi)母細胞瘤細胞EJ 人膀胱癌細胞 大鼠結(jie)合珠蛋(dan)白/觸珠(zhu)蛋(dan)白(Hpt/HP)ELISA試劑盒(he) ANGA(Human anti-neutrophil granules antibody)  人抗(kang)中(zhong)性粒(li)細胞顆粒(li)抗(kang)體(ti) THP-1細胞，人單核(he)細胞 人肺腺癌(ai)細胞,H1299細胞 A549/DDP, 人肺腺癌(ai)耐(nai)藥細胞株

SPN Others Mouse 小(xiao)鼠 SPN / CD43 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao)) 大(da)鼠結(jie)合珠蛋(dan)白/觸珠(zhu)蛋(dan)白(Hpt/HP)ELISA 試劑盒(he) ANA(Human anti-neutrophil antibody)  人抗(kang)中(zhong)性粒(li)細胞抗(kang)體(ti) CL-0379MCF 7B(人癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2

SW1116人結腸腺癌(ai)細胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培養(yang)基(GIBCO)+10%FBS 大鼠結(jie)合珠蛋(dan)白(Hpt)ELISA試劑盒(he) Hpt/HP(Mouse Haptoglobin) 小(xiao)鼠結(jie)合珠蛋(dan)白/觸珠(zhu)蛋(dan)白 96T

PFKFB2： 果糖(tang)-2,6-二0酸(suan)酶心肌酶抗(kang)體(ti) HA Others H3N2 甲(jia)型(xing)流(liu)感(gan) H3N2 (A/Brisbane/10/2007) 血(xue)凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

人急性淋(lin)巴母(mu)細胞性白血(xue)病(bing)細胞;MOLT-4 大鼠結(jie)締組織生長(chang)因(yin)子(CTGF)ELISA試劑盒(he) apo-A1  大(da)鼠載脂蛋(dan)白A1 96T