bEnd.3小(xiao)鼠(shu)腦微血(xue)管內皮細胞株

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用、不得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入 5ml 培養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈澱細胞用 1-2ml 培養基重懸，然後(hou)按 1:2 比例進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中(zhong)培養；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入培養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入-80℃過夜，24h 後(hou)轉入液氮中(zhong)進(jin)行長期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降溫盒(he)可直接(jie)放入-80℃。

壹(yi)、商品介紹(shao)：

二(er)、細胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以下細胞培養凍存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體操作(zuo)步驟以隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍，加4 mL培養基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培養基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有細胞懸液加入含(han)適(shi)量培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培養基，培養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢查(zha)細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如(ru)果細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培養上(shang)清，用不含(han)鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有細胞，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞大部(bu)分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸液按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時，可(ke)進行細胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培養液(ye)，裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數。

b、根據(ju)細胞數量加入無血(xue)清細胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管位置(zhi)以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：

大(da)鼠(shu)子(zi)宮成(cheng)纖維(wei)細胞培養基 100mL 大鼠早(zao)老素2(PS2)ELISA試(shi)劑盒(he) OVA/RBITC 羅丹(dan)明標(biao)記(ji)雞卵(luan)白蛋(dan)白 0.3ml

LRIG1： LRIG1抗(kang)體 SP2/0, 小鼠骨髓(sui)瘤細胞 小細胞肺癌細胞,NEI-H209細胞 ECV304(人(ren)臍(qi)靜脈內皮(pi)細胞株)

APOA1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) ApoA1 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)早老素(su)1(PSEN1)ELISA試(shi)劑盒(he) AACT/RBITC 羅丹(dan)明標(biao)記(ji)胰 0.3ml

LRIG3： LRIG3抗(kang)體 小鼠誘(you)導(dao)性多潛能(neng)幹(gan)細胞;PUMC-mips-C2

Lec1倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細胞 Lec1 Chinese hamster ovary cells MEMα培養基(GIBCO)+10%FBS 大鼠早(zao)老素1(PS-1)ELISA試(shi)劑盒(he) Insulin Protein/FITC 熒(ying)光素標記(ji)人(ren)胰島(dao)素(su)蛋(dan)白 0.5ml

HEBP1： 血(xue)紅素結(jie)合(he)蛋(dan)白1抗(kang)體 PPT1 Others Human 人(ren) PPT1 / Palmitoyl-protein thioesterase 1 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

U-87 MG人(ren)腦星(xing)形(xing)膠質母(mu)細胞瘤 U-87 MG of brain asocytic blastoma DMEM+10% FBS 人(ren)抗(kang)染(ran)色體抗(kang)體(ai-chromosome Ab)ELISA 試(shi)劑盒(he) Apelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗(kang)原 0.5mg

Hemoglobin alpha： 血(xue)紅蛋(dan)白α抗(kang)體 犬(quan)腎(shen)細胞系/野(ye)生型;MDCK/wild Mo-MuLv感(gan)染(ran)的(de)3T3細胞，Mo-MuLv/3T3細胞 LA795細胞，小鼠(shu)肺腺(xian)癌細胞系

C10ORF54 Others Human 人(ren) B7-H5 / Gi24 / VISTA 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 人(ren)抗(kang)浦(pu)肯野細胞抗(kang)體/抗(kang)Yo抗(kang)體(PCA-1/Yo)ELISA 試(shi)劑盒(he) APG4B/AUTL1 APG4B細胞自噬(shi)相(xiang)關抗(kang)原 0.5mg

Haptoglobulin beta： 結(jie)合(he)球蛋(dan)白β抗(kang)體 CSC, 小鼠心肌細胞

bEnd.3小(xiao)鼠(shu)腦微血(xue)管內皮細胞株ENPP1： 核(he)苷酸內焦(jiao)0酸酶/0酸二酯酶1抗(kang)體 PTK6 Others Human 人(ren) PTK6 / Brk 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

HCT-8 人(ren)回(hui)盲腸(chang)癌細胞 大鼠(shu)基質細胞衍生因(yin)子(zi)1(SDF1)ELISA試(shi)劑盒(he) PM-Scl/PM-1(Human polymyositis-sclerosis antibody)  人(ren)抗(kang)多(duo)發(fa)性肌炎硬皮病抗(kang)體 NCL-H460細胞，非(fei)小(xiao)細胞肺癌 人(ren)肺動脈內皮細胞,HPAEC細胞 肝動(dong)脈(mai)平(ping)滑肌細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

KLRB1F Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) KLRB1F / NKR-P1F 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)基質溶素(su)(MAT)ELISA試(shi)劑盒(he) Human anti-PL7-antibody  人(ren)PL7抗(kang)體 CL-0232TF-1(人(ren)血(xue)液白血(xue)病細胞)5×106cells/瓶×2

786-O [786-0]人(ren)腎(shen)透(tou)明細胞腺(xian)癌細胞 786-O [786-0] human renal clear cell carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)基質金(jin)屬(shu)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制(zhi)因(yin)子(zi)4(TIMP-4)ELISA試(shi)劑盒(he) IgG  大鼠免(mian)疫球蛋(dan)白G 96T

Pet1： ETS結(jie)構(gou)域轉(zhuan)錄(lu)因(yin)子(zi)FEV抗(kang)體 TNFRSF10A Others Human 人(ren) TNFRSF10A / CD261 / APO2 人(ren)細胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首先(xian)觀察(cha)細胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有上述(shu)現(xian)象 發生請(qing)及(ji)時和我們聯系。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說(shuo)明書(shu)，了解細胞相關信(xin)息(xi)，如細胞形態(tai)、所(suo)用培養基、血(xue)清比例、所(suo)需(xu) 細胞因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞培養條件壹(yi)致，若由於(yu)培養條件不壹(yi)致而導(dao)致細胞出現(xian)問(wen)題，責任由 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞由於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎片(pian)，是正常現象。觀察(cha)好(hao)細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞直接(jie)混勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養基重懸 細胞，並接(jie)種到(dao)新的(de)培養瓶(ping)或培養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條件的(de)培養基用於(yu)細胞培養。

6. 建議客戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細胞狀態(tai)，便(bian)於(yu)和我司(si)技(ji)術部溝(gou)通 交流。由於(yu)運輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細胞會(hui)出現不穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我們聯系，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具體情況(kuang)，以便我們的(de)技(ji)術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培養基 (灌液(ye)培養基) 不能(neng)再(zai)用來培養細胞，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞培 養條件新(xin)配制的(de)培養基來培養細胞。     收到(dao)細胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。