熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR(Real-time PCR),是(shi)指在(zai)PCR擴(kuo)增(zeng)反應體(ti)系中加入熒(ying)光(guang)基(ji)團(tuan),通(tong)過對(dui)擴(kuo)增(zeng)反應中每壹(yi)個循(xun)環產(chan)物熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)的實時(shi)檢測(ce),最(zui)後(hou)通(tong)過標準曲線對(dui)未知(zhi)模板(ban)進行定(ding)量分析(xi)的方法(fa)。熒光(guang)定(ding)量PCR試(shi)劑盒(he)特(te)點及註意事項(xiang)
特(te)點:
1. 即(ji)開即用(yong),用(yong)戶(hu)只(zhi)需要(yao)提供病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)保守序列設計的專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu),與(yu)相(xiang)關病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反應。
3. 靈敏(min)度可以(yi)達到幾(ji)百拷貝(bei)/反應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測(ce),避(bi)免後(hou)續(xu)汙染。
5. 本試(shi)劑盒(he)足(zu)夠(gou) 50 次 20μL 反應體(ti)系的熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適用(yong)於(yu)科(ke)研(yan),不(bu)能(neng)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。
註意事項(xiang):
1.PCR反應應(ying)該(gai)在壹(yi)個沒(mei)有(you)DNA汙染的幹凈(jing)環境(jing)中進行。設(she)立(li)壹(yi)個的PCR實驗室。
2.純(chun)化模板(ban)所選用(yong)的方法(fa)對(dui)汙染的風險(xian)有極(ji)大(da)影(ying)響。壹(yi)般而言(yan),只(zhi)要(yao)能(neng)夠(gou)得(de)到可靠(kao)的結(jie)果,純(chun)化的方法(fa)越簡單(dan)越好(hao)。
3.所有(you)試(shi)劑都應該(gai)沒(mei)有(you)核酸和核酸(suan)酶的汙染。操作過(guo)程(cheng)中均(jun)應戴(dai)手套。
4.PCR試(shi)劑配(pei)制應(ying)使用(yong)zui高質量的新(xin)鮮(xian)雙(shuang)蒸(zheng)水(shui),采(cai)用(yong)0.22μm濾(lv)膜(mo)過(guo)濾除(chu)菌(jun)或(huo)高壓(ya)滅菌(jun)。
5.試(shi)劑都應該(gai)以大(da)體積(ji)配(pei)制,試(shi)驗壹(yi)下是(shi)否滿(man)意,然(ran)後(hou)分(fen)裝成(cheng)僅夠壹(yi)次使用(yong)的量儲(chu)存(cun),從而確(que)保實驗與(yu)實驗之間(jian)的連續性。
6.試(shi)劑或(huo)樣品(pin)準(zhun)備(bei)過程(cheng)中都要(yao)使用(yong)壹(yi)次性(xing)滅菌(jun)的塑料(liao)瓶(ping)和管子,玻璃(li)器(qi)皿應(ying)洗滌幹凈(jing)並(bing)高壓(ya)滅菌(jun)。
7.PCR的樣品(pin)應(ying)在冰浴(yu)上化(hua)開,並(bing)且要(yao)充(chong)分混(hun)勻。