DV-90細胞(bao)

公司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培養；

壹(yi)、商品(pin)介紹(shao)：

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞(bao)，並放置於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中進行(xing)長期(qi)保存(cun)。使用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅(jin)供參考(kao)，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含適量(liang)培養基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培養基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液並檢查細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度達 80%-90%，即可進行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄去(qu)培養(yang)上清，用(yong)不含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使消化(hua)液浸潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將(jiang)培養瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱中消化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅(xun)速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱中培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生(sheng)長狀態良好時(shi)，可進行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據細胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存(cun)管做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

組(zu)織NADPH氧(yang)化(hua)酶活性化(hua)學(xue)發光(guang)法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

HIS標記(ji)蛋(dan)白擴(kuo)增試(shi)劑盒

通(tong)用(yong)型HCV亞型（HEPATITIS VIRUS C）病毒(du)定性檢測(ce)試(shi)劑盒

細胞(bao)NF KAPPA B P50蛋(dan)白表(biao)達熒(ying)光(guang)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

轉基(ji)因(yin)玉(yu)米(mi)T25品(pin)系(xi)基(ji)因(yin)檢測(ce)試(shi)劑盒

HRP酶聯(lian)檢測(ce)封閉(bi)溶(rong)液

組(zu)織SPHK1激(ji)酶活性定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒（A/B/C）

過(guo)氧(yang)化(hua)氫處理DNA損傷彗星熒(ying)光(guang)檢測(ce)試(shi)劑盒

石蠟(la)切(qie)片脂肪(fang)組織染(ran)色(se)試(shi)劑盒

細菌磷(lin)脂酶D1（Phospholipase D1）活性比色(se)法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

環(huan)境(jing)鈣離(li)子濃(nong)度(du)熒(ying)光(guang)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

魚(yu)類(lei)組(zu)織汞元(yuan)素(su)比(bi)色(se)法(fa)定量(liang)檢測(ce)試(shi)劑盒

造(zao)血(xue)祖(zu)細胞(bao)激(ji)酶1抗(kang)體(ti)

甘(gan)脫羧(suo)酶P蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

趨(qu)化(hua)素(su)樣因子超(chao)家(jia)族成(cheng)員3抗(kang)體(ti)

KB抑(yi)制蛋(dan)白激(ji)酶γ抗(kang)體(ti)

細胞(bao)間粘(zhan)附(fu)分(fen)子(zi)-1（CD54）抗(kang)體(ti)

ZDHHC19蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

跨(kua)膜(mo)和泛素樣結構(gou)域(yu)蛋(dan)白1抗(kang)體(ti)

DV-90細胞(bao)APC標記(ji)小鼠(shu)CD8a單克隆抗(kang)體(ti)

鋅指蛋(dan)白836抗(kang)體(ti)

三(san)、培(pei)養(yang)註意事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保細胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由於培(pei)養(yang)條件(jian)不壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細胞(bao)狀態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸 細胞(bao)，並接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養皿中，置於培(pei)養(yang)箱中進行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因，個別(bie)敏感(gan)細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的情(qing)況，請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說明(ming)書細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養基(ji)來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。