EB1細(xi)胞

公(gong)司(si)產品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

壹(yi)、商品介紹(shao)：

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加入(ru)培養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期保(bao)存(cun)。使用(yong)程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞培養操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供參(can)考，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明書為(wei)主(zhu)。將含有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖晃解凍(dong)，加4 mL培養基混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培養基後(hou)吹勻。然後(hou)將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)含(han)適(shi)量培養基的培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並(bing)檢查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如果細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清，用(yong)不含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將培養瓶(ping)置於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而(er)定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變圓並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培養液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含8 mL培養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶中，置於培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養液，裝(zhuang)入(ru)無菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以便下次拿(na)取(qu)。

公司(si)正在出售的(de)產(chan)品：

細(xi)胞NADPH氧化(hua)酶(mei)活性比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

GST融(rong)合(he)蛋白純化(hua)試(shi)劑盒(he)

（1a、1b、2a、2b、3a、3b）

NF KAPPA B P50蛋白表達西(xi)方(fang)雜交(jiao)分析(xi)試劑(ji)盒(he)

轉(zhuan)基因玉(yu)米(mi)NK603品系基因檢測試劑(ji)盒(he)

通(tong)用(yong)AP酶(mei)聯(lian)檢測(ce)封閉(bi)溶液

細(xi)胞SPHK2激(ji)酶(mei)活性(xing)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

內切(qie)酶III處(chu)理(li)DNA損(sun)傷彗星(xing)熒光(guang)檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

石(shi)蠟(la)切(qie)片軟(ruan)骨組織(zhi)染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞磷脂(zhi)酶D1（Phospholipase D1）活(huo)性(xing)熒光(guang)定量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

石(shi)蠟(la)切(qie)片馮(feng)庫薩(sa)（VON KOSSA）鈣(gai)染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞汞(gong)元素比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

DHPR受(shou)體(ti)蛋白免疫(yi)共沈(chen)澱(dian)分析(xi)試劑(ji)盒(he)

組織(zhi)基質金(jin)屬（MMP-7）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

結(jie)晶紫(zi)細(xi)胞群(qun)落(luo)染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

增(zeng)強型(xing)黃(huang)色(se)熒光(guang)蛋白單克(ke)隆(long)抗體(ti)

甘轉(zhuan)運(yun)蛋白1抗體(ti)

趨化(hua)素樣因子(zi)超(chao)家(jia)族成員5抗體(ti)

KB抑制蛋白激酶(mei)γ重組兔(tu)單克(ke)隆(long)抗體(ti)

細(xi)胞間(jian)粘附(fu)分子(zi)-2（CD102）抗體(ti)

ZDHHC23蛋白抗體(ti)

跨(kua)膜(mo)和卷(juan)曲螺(luo)旋(xuan)結(jie)構(gou)域(yu)蛋白1抗體(ti)

EB1細(xi)胞APC標(biao)記小(xiao)鼠CD90單克(ke)隆(long)抗體(ti)

鋅(xin)指蛋白837抗體(ti)

三(san)、培養註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否完好，培養液是否有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了(le)解細(xi)胞相關(guan)信息，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養基、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件不壹(yi)致而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞由(you)於溫(wen)度(du) 變化(hua)及(ji)劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是正常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養基重懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的(de)培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件的(de)培養基用(yong)於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技術部(bu)溝通 交流。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞會出現(xian)不穩定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具(ju)體情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養基 (灌液培養基) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培養細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞培 養條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養基來培養細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。