F98npEGFRvIII細胞

公司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變圓後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細胞使之脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上清，沈澱細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

壹、商品介(jie)紹：

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變圓後加入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細胞使之脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放(fang)置於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進(jin)行(xing)長期保(bao)存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下細胞培養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供(gong)參考(kao)，具(ju)體操作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明書為(wei)主。將(jiang)含有(you)1 mL細胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基後吹勻。然(ran)後將(jiang)所有(you)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所有(you)細胞，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分(fen)變圓並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲幾下培養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液後吹勻。

c、將(jiang)細胞懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新皿中或者瓶(ping)中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細胞及細(xi)胞培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無(wu)血清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

組織(zhi)半(ban)-2（CASPASE-2）活(huo)性熒(ying)光定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

GST融合(he)蛋白(bai)THROMBIN酶(mei)切試(shi)劑(ji)盒(he)

體液(ye)科(ke)薩(sa)基(ji)病毒(du)B（Coxsackievirus B）定(ding)性檢測(ce)試劑(ji)盒(he)

RHO 蛋白(bai)表(biao)達ELISA定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

轉(zhuan)基(ji)因油菜（canola）OXY235品系(xi)基(ji)因檢測試劑(ji)盒(he)

物理法石蠟切片(pian)抗(kang)原修(xiu)復(fu)處理試劑(ji)盒(he)

組織(zhi)糖原磷(lin)酸(suan)化(hua)酶(mei)激酶(mei)（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE KINASE）活(huo)性酶(mei)連(lian)續循(xun)環比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

酵(jiao)母(mu)DNA損傷彗星(xing)熒(ying)光檢(jian)測試劑盒(he)

冰凍(dong)切(qie)片(pian)氧(yang)化(hua)酶(mei)和琥珀酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（Combined COX-SDH）雙酶(mei)活(huo)性染(ran)色(se)試劑盒(he)

藥(yao)品前(qian)列E2（PGE2）高效液相(xiang)色譜法紫外(wai)定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

FIS-1蛋白(bai)表(biao)達檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

砷元(yuan)素(su)檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)處理試劑(ji)盒(he)

細胞CYP2B1蛋白(bai)表(biao)達流(liu)式(shi)細胞儀檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

細胞基質(zhi)金(jin)屬（MMP-10）活(huo)性熒(ying)光定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

糖耗(hao)損法細(xi)胞繁殖(zhi)與毒性定(ding)量檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)

粘蛋白(bai)/巖(yan)藻糖基轉(zhuan)移(yi)酶(mei)3抗(kang)體(ti)

甘露聚(ju)糖結合凝(ning)集素絲(si)肽(tai)酶(mei)1抗(kang)體(ti)

去泛(fan)素(su)化(hua)酶(mei)3抗(kang)體(ti)

KDELR3蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

細胞角蛋白(bai)15重(zhong)組兔單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)

ZNHIT2蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

跨膜(mo)絲(si)蛋白(bai)酶(mei)13抗(kang)體(ti)

F98npEGFRvIII細胞ARM重(zhong)復(fu)X連(lian)鎖(suo)蛋白(bai)ARMCX1抗(kang)體(ti)

鋅指蛋白(bai)879抗(kang)體(ti)

三、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好，培養(yang)液是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細胞說明書，了(le)解細(xi)胞相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血清比(bi)例、所需 細(xi)胞因子等，確保細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致細(xi)胞出現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞由(you)於溫度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮的(de)培養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞後前 3 天各拍(pai)幾張細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個別敏(min)感細(xi)胞會出(chu)現(xian)不穩定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培養(yang)基) 不(bu)能(neng)再用(yong)來培養(yang)細胞，請換(huan)用(yong)按(an)照說明書細胞培 養(yang)條件(jian)新配制(zhi)的(de)培養(yang)基來培養(yang)細胞。     收到(dao)細(xi)胞後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。