FU-RPNT-2細(xi)胞(bao)

公司(si)產(chan)品(pin)僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不得(de)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細胞(bao)傳代：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比(bi)例進行分(fen)瓶傳代，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養；

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養液終

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存。使用程序(xu)

降溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處理(li)僅供參(can)考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖晃解凍，加4 mL培養基(ji)混合均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加入含(han)適量(liang)培養基(ji)的培(pei)養瓶中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並檢(jian)查細胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果細胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳代培養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上清(qing)，用不含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使消化(hua)液浸潤所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞(bao)消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落，迅速拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培養基(ji)的新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態良好時，可(ke)進行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集細胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加入無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支(zhi)凍存管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲存。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售的產(chan)品(pin)：

組織半(ban)-4（CASPASE-4）活(huo)性(xing)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

TEXAS RED蛋(dan)白標(biao)記試劑(ji)盒

體液人體鼻(bi)病(bing)毒(du)（rhinovirus）定(ding)性(xing)檢(jian)測試劑(ji)盒

冰(bing)凍切(qie)片(pian)組織CREB蛋(dan)白表(biao)達(da)NBT顯(xian)色(se)光學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測試劑(ji)盒

轉(zhuan)基(ji)因(yin)棉(mian)花(hua)SGK321品(pin)系基(ji)因(yin)檢(jian)測試劑(ji)盒

HRP標(biao)記抗體穩(wen)定(ding)/稀(xi)釋溶液

組織蛋(dan)白磷酸酶(mei)2A （PP2A）活(huo)性(xing)比色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

1.00671011110113E+19

冰(bing)凍切(qie)片(pian)肌(ji)腺(xian)苷酸脫(tuo)氨(an)酶(mei)（Myoadenylate deaminase）活(huo)性(xing)

白三烯(xi)A4（Leukotriene A4 ；LTA4）高(gao)效液相色(se)譜法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

純(chun)化(hua)微管蛋(dan)白（Tubulin）

組織N-乙酰(xian)轉(zhuan)移酶(mei)（NAT）活(huo)性(xing)比色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

細(xi)胞(bao)CYP2B1蛋(dan)白表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

體液基(ji)質(zhi)金屬（MMP-12）活(huo)性(xing)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒

二熒(ying)光(guang)素（Fluorescein diacetate）植(zhi)物(wu)細胞(bao)繁(fan)殖測定(ding)試劑(ji)盒

粘蛋(dan)白-2/上(shang)皮(pi)膜(mo)抗原(yuan)2抗(kang)體

甘油二酯(zhi)激酶(mei)α/DGK-α抗(kang)體

去(qu)整(zheng)合素樣金屬10（CD156c）抗(kang)體

Kelch樣蛋(dan)白15抗(kang)體

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋(dan)白18抗(kang)體

ZSWIM4蛋(dan)白抗(kang)體

快速骨骼肌肌(ji)球(qiu)蛋(dan)白輕(qing)鏈(lian)2抗(kang)體

FU-RPNT-2細胞(bao)ATP5A抗體

鋅(xin)指(zhi)蛋(dan)白923抗(kang)體

三、培養註意事項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述現象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細胞(bao)說明書(shu)，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息，如細胞(bao)形(xing)態、所用培養基(ji)、血清(qing)比例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培養條(tiao)件不壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察好細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化(hua)，懸浮細胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培養皿中(zhong)，置於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件的培(pei)養基(ji)用於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我司(si)技術部(bu)溝通 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不穩定(ding)的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系，告知(zhi)細胞(bao) 的具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技術人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運輸(shu)用的培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新配(pei)制的培(pei)養基(ji)來培(pei)養細胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。