GB-1細(xi)胞(bao)

公司產(chan)品僅供科(ke)研(yan)研究使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床診斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行分瓶傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹(yi)、商(shang)品介紹：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中；

4）先(xian)將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供參考，具體(ti)操作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明(ming)書為主。將含有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所有細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細胞(bao)懸液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液並檢(jian)查(zha)細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤(run)所有細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿中或(huo)者瓶中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據(ju)細胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸液(ye)，註意凍(dong)存(cun)管做好標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以便(bian)下次拿取(qu)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品：

組織半(ban)-6（CASPASE-6）活性比色法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

5-TAMRA蛋白標(biao)記試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞人(ren)體(ti)腺病(bing)毒（adenovirus）定性檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

CREB蛋白表(biao)達(da)ELISA定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

動物源性飼(si)料(liao)羊源基因(yin)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

通用型(xing)HRP復合(he)物(wu)穩(wen)定/稀釋(shi)溶液(ye)

組織鈣調蛋白（CaM）活性酶連續循環比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

50017

石蠟(la)切片糖(tang)原高碘(dian)酸(suan)希(xi)爾（PAS）法染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

12-羥基二十四烯酸(suan)（12-HETE）高效液相色譜(pu)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

粘著斑(ban)蛋白（vinculin）熒光染色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

人(ren)體(ti)組織N-乙酰轉移(yi)酶2（NAT2）活性比色法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

冰凍(dong)切片組織βAMYLOID蛋白表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞基質(zhi)金屬(shu)（MMP-13）活性比色法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

聚(ju)乙二醇細胞(bao)融合試(shi)劑(ji)盒(he)

粘蛋白-5B抗體(ti)

甘油二酯(zhi)激酶ι/DGK-ι抗體(ti)

去整合素(su)樣金屬(shu)18抗體(ti)

Kelch樣蛋白24抗體(ti)

細胞角蛋白19片段(CYFR21-1)抗體(ti)

ZYG11BL蛋白抗(kang)體(ti)

狂犬病(bing)病(bing)毒糖(tang)蛋白抗(kang)體(ti)

GB-1細(xi)胞(bao)ATPIF1蛋白抗(kang)體(ti)

鋅指蛋白98抗(kang)體(ti)

三(san)、培(pei)養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶是否(fou)完好，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象 發(fa)生請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解細胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出現問題，責任由 客戶自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題，部(bu)分細胞(bao)由於溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正常現(xian)象。觀(guan)察好細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接混勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重懸 細胞(bao)，並接種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片，記錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部(bu)溝通 交(jiao)流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定的(de)情況，請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯系(xi)，告知細胞 的(de)具體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹(yi)次傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。