GCIY細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加入 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養；

壹、商(shang)品介紹：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後加入培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體(ti)操作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入含適量(liang)培養基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入10 cm皿中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)），然後在(zai)顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比例分到新的含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

細(xi)胞(bao)半(ban)-6（CASPASE-6）活性(xing)熒光定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

CY3蛋(dan)白(bai)標(biao)記(ji)試劑盒

組(zu)織(zhi)人(ren)體(ti)腺(xian)病毒(du)（adenovirus）定(ding)性檢(jian)測(ce)試劑盒

細(xi)胞(bao)DAP KINASE蛋(dan)白(bai)表(biao)達流式細(xi)胞(bao)儀檢測(ce)試劑盒

動物源性(xing)飼(si)料(liao)牛(niu)源(yuan)基(ji)因(yin)檢(jian)測(ce)試劑盒

酪(lao)胺信號擴(kuo)增(zeng)試劑盒

植(zhi)物鈣(gai)調(tiao)蛋(dan)白(bai)（CaM）活性(xing)酶連(lian)續循(xun)環(huan)比色(se)法(fa)定量檢(jian)測(ce)試劑盒

10155

冰(bing)凍(dong)切片(pian)糖(tang)原高碘(dian)酸希(xi)爾（PAS）法(fa)染色試劑盒

15-羥(qiang)基(ji)二十四烯酸（15-HETE）高效(xiao)液(ye)相色譜法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒

驅(qu)動蛋(dan)白(bai)（kinesin）型(xing)ATP酶(mei)活性(xing)酶連(lian)續反(fan)應(ying)光譜法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒

人(ren)體細(xi)胞(bao)N-乙(yi)酰轉(zhuan)移酶(mei)1（NAT1）活性(xing)熒光定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

石(shi)蠟切片(pian)組(zu)織(zhi)βAMYLOID蛋(dan)白(bai)表(biao)達熒(ying)光顯微鏡檢測(ce)試劑盒

組(zu)織(zhi)基(ji)質(zhi)金(jin)屬（MMP-13）活性(xing)比色(se)法(fa)定量檢測(ce)試劑盒

電(dian)擊法細(xi)胞(bao)融(rong)合(he)試劑盒

粘(zhan)蛋白(bai)6單(dan)克隆抗體(ti)

甘(gan)油二(er)酯激酶κ/DGK-κ抗體(ti)

去(qu)整合(he)素(su)樣(yang)金(jin)屬19抗體(ti)

Kelch樣(yang)蛋白(bai)26抗體(ti)

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋(dan)白(bai)19重組(zu)兔單克隆抗體(ti)

α -新內(nei)啡(fei)肽抗體(ti)

狂躁(zao)基(ji)因(yin)同(tong)源(yuan)蛋(dan)白(bai)MFNG抗體(ti)

GCIY細(xi)胞(bao)ATP合成(cheng)酶(mei)β5抗體(ti)

鋅(xin)指蛋(dan)白(bai)99抗體(ti)

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完好，培養液(ye)是否(fou)有漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上述(shu)現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於培養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我司(si)技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流。由於運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不穩定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技(ji)術(shu)人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。