GM2005細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供科研研究使用、不得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入 5ml 培養

液終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫落，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中(zhong)培養；

壹、商品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入培養液終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之脫落，然(ran)後(hou)將懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進行長期(qi)保(bao)存。使用程(cheng)序(xu)

降溫盒可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加1-2 mL培養基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入含適量(liang)培(pei)養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即可進(jin)行傳代培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液浸潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新(xin)的(de)含8 mL培養基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好標識(shi)。將凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲存。記錄凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿(na)取。

公司正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

細(xi)胞(bao)半(ban)-8（CASPASE-8）活(huo)性比(bi)色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

抗(kang)體(ti)蛋(dan)白質A標記制備試(shi)劑盒

線(xian)蟲(chong)繁殖培養試劑盒

石(shi)蠟切(qie)片(pian)組(zu)織DAP KINASE蛋(dan)白表達NBT顯色光(guang)學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測試(shi)劑盒

植(zhi)物源(yuan)性飼料(liao)處(chu)理試劑盒

核(he)固紅(hong)復染試(shi)劑盒

細(xi)胞(bao)絡磷酸酶（TP）活(huo)性熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

超(chao)氧(yang)化物歧化酶（SOD）組(zu)織裂解(jie)樣(yang)品(pin)制備試(shi)劑盒

Dystrophin

前列(lie)D2（PGD2）高效液相色譜法定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

載(zai)玻片(pian)細(xi)胞(bao)αSMA蛋(dan)白表達NBT顯色光(guang)學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測試(shi)劑盒

動(dong)物細(xi)胞(bao)N-乙(yi)酰轉(zhuan)移(yi)酶2（NAT2）活(huo)性比(bi)色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

βAMYLOID蛋(dan)白表達西方(fang)雜交分析試(shi)劑盒

電(dian)泳分(fen)析試(shi)劑盒（MMP2/9）

活(huo)體(ti)細(xi)胞(bao)線(xian)粒體(ti)內(nei)膜功(gong)能(neng)/膜電位(wei)紅(hong)色熒(ying)光(guang)（TMRM）測定(ding)試(shi)劑盒

粘附(fu)分(fen)子JAML蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

甘(gan)油(you)磷酸二(er)酯酶(mei)磷酸結(jie)構(gou)域(yu)3抗(kang)體(ti)

去(qu)整(zheng)合(he)素(su)樣(yang)金(jin)屬(shu)9抗(kang)體(ti)

Kelch樣(yang)蛋(dan)白36抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)角(jiao)蛋(dan)白23抗(kang)體(ti)

α1B糖蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

GM2005細(xi)胞(bao)辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化物酶標記β2-微球(qiu)蛋(dan)白單克隆抗(kang)體(ti)(檢(jian)測)

ATP結(jie)合(he)蛋(dan)白家(jia)族7抗(kang)體(ti)

鋅指(zhi)蛋(dan)白BED3抗(kang)體(ti)

三、培養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培(pei)養液是否(fou)有漏液、渾濁等現象，若有(you)上述現象 發(fa)生請及時(shi)和(he)我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化及劇烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培(pei)養基重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進行培養。

5. 請客戶用(yong)相同條件的培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和(he)我們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科研使用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培養基 (灌液培養基) 不能(neng)再(zai)用(yong)來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的培(pei)養基來(lai)培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。