RLE-6TN大(da)鼠肺(fei)泡(pao)II型細(xi)胞

公(gong)司產品僅供(gong)科研研究使用、不(bu)得用於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈(chen)澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行分瓶傳代，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹(yi)、商品(pin)介紹(shao)：

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並放(fang)置於(yu)凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期保存。使用程序

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處理(li)僅供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說明書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜（或將細胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液並檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳代：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進(jin)行傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使消化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變(bian)圓並脫落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基的新皿中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀態良好時，可進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血(xue)清細胞凍(dong)存(cun)液，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支凍(dong)存(cun)管凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存管做好標識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下次拿取。

公司正(zheng)在出售的產品：

NFIA： 核因子(zi)1A抗體(ti) 大(da)鼠肺(fei)細(xi)胞;WL1

人小神經(jing)膠(jiao)質(zhi)細胞(HM) ( 5×105 ) 人(ren)海馬神(shen)經(jing)元 Human 大(da)鼠(Coisol)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 hs-CRP  大(da)鼠超(chao)敏(min)C反(fan)應蛋(dan)白(bai) 96T

NHLH1： 環壹(yi)螺旋(xuan)蛋(dan)白(bai)1抗體(ti) 大(da)鼠骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞;UMR-106

IL7 Protein Rat 重組大(da)鼠 IL7 / ierleukin 7 蛋(dan)白(bai) 大(da)鼠皮(pi)敵(di)菌(jun)素(DCD)ELISA試(shi)劑(ji)盒 TSA(Human tumor specific antigen)  人特(te)異(yi)性抗原(yuan) 96T

NME4： 轉移抑制(zhi)基(ji)因H4抗體(ti) DAPK3 Others Human 人 DAPK3 / ZIPK 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao))

WB-F344細胞，大(da)鼠肝(gan)上皮(pi)樣(yang)幹(gan)細胞 HL-60(白(bai)血(xue)病原髓(sui)細胞) 大(da)鼠肝(gan)細胞瘤(liu);H4-II-E-C3 犬白(bai)介素6(IL-6)ELISA試(shi)劑(ji)盒 OAT-1 (Organic anion transporter 1)mouse、rat 陰(yin)離子(zi)轉(zhuan)運(yun)蛋(dan)白(bai)-1(大(da)、小鼠(shu)同源(yuan)：人(ren)源(yuan)見(jian)bs-0606P) 0.5mg

IFT20： 細胞纖(xian)毛內(nei)轉(zhuan)運(yun)同源(yuan)蛋(dan)白(bai)20抗體(ti) REG4 Others Human 人 REG4 / RELP / GISP 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao))

人視網膜色(se)素上皮(pi)細(xi)胞cDNAHRPEpiC cDNA 犬白(bai)介素4(IL-4)ELISA試(shi)劑(ji)盒 OAT-3(Organic anion transporter 3) 陰(yin)離子(zi)轉(zhuan)運(yun)蛋(dan)白(bai)-3(抗原(yuan)) 0.5mg

IFT43： 細胞纖(xian)毛內(nei)轉(zhuan)運(yun)同源(yuan)蛋(dan)白(bai)43抗體(ti) 人前(qian)列(lie)腺(xian)癌(ai)細胞;PC-3 [PC3]

ZR-75-1(人癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 C3H/An小(xiao)鼠(shu)結締組織(zhi)細(xi)胞(L929-TK-);LTK- 犬白(bai)介素2(IL-2)ELISA試(shi)劑(ji)盒 galectin 9 半乳糖(tang)凝集(ji)素9(抗原(yuan)) 0.5mg

RLE-6TN大(da)鼠肺(fei)泡(pao)II型細(xi)胞Raptor： mTOR相(xiang)關調(tiao)控(kong)蛋(dan)白(bai)抗體(ti) A375細胞，惡(e)性黑(hei)色素瘤(liu)細(xi)胞 人(ren)外周血(xue)嗜(shi)堿(jian)性白(bai)細(xi)胞,KU812細(xi)胞 人(ren)導(dao)管(guan)癌(ai)細胞;ZR-75-1

CST1 Others Human 人 CST1 / Cystatin-1 / Cystatin-SN 人細胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao)) 大(da)鼠α白(bai)蛋(dan)白(bai)(AFM)ELISA試(shi)劑(ji)盒 VCL(Human vinculin)  人紐蛋(dan)白(bai) 96T

Phospho-Raptor (Ser792)： 0酸化(hua)mTOR相(xiang)關調(tiao)控(kong)蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 恒河(he)猴(hou)腎(shen)細胞;RM-2

CM-M014小鼠氣管和(he)支氣管上皮(pi)細(xi)胞培(pei)養(yang)基100mL 大(da)鼠αL巖(yan)藻糖苷酶(AFU)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Ntn4(Human Netrin-4)  人軸突(tu)生長誘向因(yin)子(zi)4 96T

phospho-c-Raf (Ser289)： 0酸化(hua)原癌(ai)基因(yin)c-Raf抗體(ti) IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 6-77) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性對照(zhao))

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首先觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上述現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及時和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說明書，了解細胞相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細胞形態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保細胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀察(cha)細(xi)胞狀態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成碎(sui)片，是正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察(cha)好細胞狀態後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並接(jie)種到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同條件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態，便於(yu)和(he)我司技術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流。由於(yu)運輸(shu)的原因，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便我們的技術(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科研使用。

8. 備註：運輸(shu)用的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說明書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。