ELISA試(shi)劑(ji)盒是壹(yi)種(zhong)用(yong)於(yu)檢(jian)測生(sheng)物(wu)樣(yang)本中(zhong)特定(ding)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)的(de)生物化(hua)學(xue)工(gong)具。其全(quan)稱是酶(mei)聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)測定(ding)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）試(shi)劑(ji)盒。ELISA試(shi)劑(ji)盒通(tong)過(guo)利用(yong)抗(kang)原(yuan)與(yu)抗(kang)體(ti)之(zhi)間(jian)的特異性結(jie)合(he)反應(ying)，結(jie)合(he)酶(mei)催化(hua)底物顯(xian)色(se)，來(lai)實現(xian)對目(mu)標物(wu)質的定量(liang)或(huo)定(ding)性檢(jian)測。

使用(yong)ELISA試(shi)劑(ji)盒時需要(yao)註(zhu)意以下幾個關(guan)鍵(jian)問題，以確保實驗的(de)準(zhun)確性和可靠(kao)性(xing)：

1、嚴(yan)格遵(zun)循(xun)說明(ming)書

每(mei)個ELISA試(shi)劑(ji)盒都(dou)有(you)詳細(xi)的說明(ming)書，必須(xu)嚴(yan)格按(an)照說明(ming)書的操(cao)作步(bu)驟(zhou)進(jin)行，包括(kuo)試(shi)劑(ji)的配制(zhi)、加樣(yang)、孵育(yu)、洗滌(di)、顯色(se)和結(jie)果讀(du)取等(deng)。

2、試(shi)劑(ji)盒的(de)選擇(ze)

選擇(ze)適(shi)合(he)的ELISA試(shi)劑(ji)盒，考(kao)慮(lv)種屬、樣本類(lei)型、檢測因子(zi)的濃(nong)度範圍(wei)以及檢測靈(ling)敏度和特異性。比(bi)較(jiao)不(bu)同品牌(pai)和廠家(jia)的(de)產(chan)品(pin)，考(kao)慮(lv)其技(ji)術(shu)資(zi)料(liao)、性能(neng)參(can)數(shu)和用(yong)戶(hu)評價。

3、試(shi)劑(ji)盒的(de)保(bao)存與(yu)平衡

ELISA試(shi)劑(ji)盒應(ying)按(an)照標簽說明(ming)書儲存，通常(chang)在(zai)2-8℃的(de)溫度下保存，以確保其穩(wen)定(ding)性和活性(xing)。對於(yu)長(chang)時間(jian)不使用(yong)的(de)試(shi)劑(ji)盒，建議置於-20℃或(huo)更(geng)低(di)的(de)溫度下保存，以延(yan)長(chang)其有(you)效期(qi)。試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏環境(jing)中取出後(hou)，應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡15-30分(fen)鐘後(hou)方(fang)可使用(yong)，以確保試(shi)劑(ji)的穩(wen)定(ding)性和準(zhun)確性。

4、樣(yang)本處(chu)理

①.‌保(bao)存與(yu)預(yu)處理

避(bi)免(mian)反復凍融(rong)樣本，分(fen)裝(zhuang)後(hou)-80℃保(bao)存（短期(qi)可4℃）。

溶血(xue)/脂(zhi)血(xue)樣本需(xu)離(li)心(xin)去(qu)除(chu)幹(gan)擾物(wu)（如(ru)紅細胞(bao)釋放(fang)過(guo)氧化物酶(mei)）。

②.‌稀釋(shi)與(yu)加(jia)樣

樣(yang)本稀釋(shi)倍(bei)數(shu)需(xu)與(yu)說明(ming)書壹致(zhi)（如(ru)5倍(bei)稀釋(shi)結(jie)果需(xu)×5換(huan)算(suan)）。

加(jia)樣時槍(qiang)頭懸(xuan)空至(zhi)孔(kong)底，避免(mian)觸(chu)碰(peng)孔壁導致(zhi)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

5、實(shi)驗操作(zuo)的(de)規(gui)範性(xing)

加(jia)樣與(yu)孵育(yu)：各步(bu)加樣(yang)均應(ying)使用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並經常校(xiao)對其準(zhun)確性，以避免(mian)試(shi)驗誤(wu)差。壹(yi)次(ci)加樣(yang)時間(jian)控制(zhi)在(zai)5分(fen)鐘內，如(ru)標本數(shu)量(liang)多(duo)，推(tui)薦(jian)使用(yong)排(pai)槍(qiang)加樣(yang)。在(zai)酶(mei)標板的(de)相應(ying)孔(kong)中加入(ru)待檢(jian)樣本和對照(zhao)樣(yang)本，壹(yi)般(ban)每孔(kong)加(jia)入(ru)100μL左(zuo)右(you)的(de)樣(yang)本或(huo)對照(zhao)液(ye)，註(zhu)意避(bi)免(mian)產生(sheng)氣(qi)泡。將酶(mei)標板放(fang)入(ru)孵育(yu)箱中(zhong)，在(zai)37℃下孵育(yu)30分(fen)鐘至(zhi)1小(xiao)時，以確保樣本中(zhong)的(de)抗(kang)原與(yu)酶(mei)標板上(shang)的抗體(ti)以及標記(ji)抗(kang)體(ti)能(neng)夠(gou)充分結(jie)合(he)。‌

6、安全(quan)與(yu)廢棄物處理

①.安全(quan)操(cao)作：底物A應(ying)揮(hui)發(fa)，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)打(da)開(kai)蓋子。底物B對光敏感(gan)，避(bi)免(mian)長(chang)時間(jian)暴露(lu)於光下。避免(mian)用(yong)手接(jie)觸(chu)，有(you)毒。實(shi)驗(yan)完(wan)成後(hou)應(ying)立(li)即讀(du)取OD值(zhi)。

②.廢棄物處理：所(suo)有(you)樣品(pin)，洗滌(di)液(ye)和各種廢棄物都(dou)應(ying)按(an)傳染(ran)物處理。

通(tong)過遵循(xun)上(shang)述註(zhu)意事(shi)項(xiang)，可以提(ti)高(gao)ELISA實(shi)驗的準(zhun)確性和可靠(kao)性(xing)，確保實驗結(jie)果的(de)有(you)效性(xing)。