IEC-18大(da)鼠(shu)回(hui)腸細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供科(ke)研研(yan)究使用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例進(jin)行分(fen)瓶傳代(dai)，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹：

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中(zhong)進(jin)行長(chang)期保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序

降溫盒可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍存(cun)處理(li)僅(jin)供參(can)考，具(ju)體(ti)操作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨產品(pin)說明書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下(xia)離心3 min，棄去上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代(dai)：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況而(er)定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長(chang)狀態良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收集細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離心4 min，棄去上清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好標識。將(jiang)凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出售的(de)產品(pin)：

CL-0370J774A.1(小鼠(shu)單(dan)核巨(ju)噬細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2 大(da)鼠(shu)細(xi)胞(bao)色(se)素P450氧(yang)化還原酶(CPR)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MECF(ouse eosinophil chemotactic factor)  小鼠(shu)嗜(shi)酸(suan)粒細(xi)胞(bao)趨(qu)化因(yin)子 96T

MIA2： 黑色(se)素瘤(liu)抑(yi)制活(huo)白(bai)2抗體(ti) 雜(za)交(jiao)瘤(B類(lei));Z1510C6D10F4G6

NCI-H295R(人(ren)腎(shen)上腺皮(pi)質腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 SK-N-SH(神經(jing)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 大(da)鼠(shu)細(xi)胞(bao)色(se)素P450家族成員2E1(CYP2E1)ELISA試劑(ji)盒 ADAMTS13/vWF-cp  大(da)鼠(shu)血管性(xing)血友(you)病(bing)因(yin)子裂解蛋(dan)白(bai)酶 96T

MTSS1： 轉(zhuan)移(yi)抑制(zhi)蛋白(bai)1 0.1ml

Rhesus antibody Rh FAM46C FAM46C蛋(dan)白(bai)抗體(ti) 正常大(da)鼠(shu)腎(shen)細(xi)胞(bao)(EGF受(shou)體(ti)陽性(xing));NRK49F

Histone H3 (Di Methyl K4)： 二(er)甲(jia)基化組(zu)蛋白(bai)H3K4抗體(ti) CM-M042小鼠(shu)直(zhi)腸平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基100mL

T6細(xi)胞(bao)，人(ren)舌(she)癌(ai)細(xi)胞(bao) 甲(jia)型副(fu)傷(shang)門(men)氏(shi)菌 大(da)鼠(shu)肝(gan)細(xi)胞(bao)瘤(liu);H-4-II-E 人(ren)蛋(dan)白(bai)S(Protein S)ELISA 試劑(ji)盒 HIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha) 缺(que)氧(yang)誘導因(yin)子2α 抗原(yuan) 0.5mg

Histone H3 (Di Methyl K9)： 二(er)甲(jia)基化組(zu)蛋白(bai)H3K9抗體(ti) MESDC2 Others Human 人(ren) MESDC2 / MESD 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

正(zheng)常大(da)鼠(shu)腎(shen)細(xi)胞(bao);NRK-52E 人(ren)蛋(dan)白(bai)IgA(Gliadin-IgA)ELISA 試劑(ji)盒 Histone H1b(Histone H1.4) 組(zu)蛋白(bai)H1b抗原(yuan) 0.5mg

Histone H3 (Tri Methyl K27)： 基(ji)化組(zu)蛋白(bai)H3抗體(ti) EB病毒(du)轉化的(de)人(ren)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);KMY0911

IEC-18大(da)鼠(shu)回(hui)腸細(xi)胞(bao)Ractopamine (1B12)： 小鼠(shu)抗萊克(ke)多巴(ba)胺(an)單克隆抗體(ti) SV40轉化的(de)非洲綠猴(hou)腎細(xi)胞(bao);COS-1

GH3, 大(da)鼠(shu)垂體(ti)生長(chang)激(ji)素腺(xian)瘤(liu) 大(da)鼠(shu)第(di)八因(yin)子相(xiang)關(guan)抗原(yuan)(FⅧAg)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 EPI(Human Epinephrine/Adrenaline)  人(ren) 96T

PDZD9： PDZ結(jie)構域(yu)PDZK9蛋(dan)白(bai)抗體(ti) IL1R2 Others Human 人(ren) IL1R2 / CD121b 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)永生化淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);CNLMG-B5537LC 大(da)鼠(shu)抵(di)抗素樣α(Retnla)ELISA試劑(ji)盒 ER(Human Estradiol receptor)  人(ren)雌(ci)二(er)醇(chun)受體(ti) 96T

P2RX7： 嘌(piao)呤受(shou)體(ti)P2X7抗體(ti) SV40轉化的(de)非洲綠猴(hou)腎細(xi)胞(bao);COS-7

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用(yong)培(pei)養(yang)基、血清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確(que)保細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹(yi)致，若(ruo)由於培養(yang)條件不壹(yi)致而導致細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，責任由 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶表面，顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由(you)於溫度 變(bian)化及劇烈碰亡(wang)破碎形成碎片，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養(yang)基重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的(de)培養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置於培養(yang)箱中進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件的(de)培養(yang)基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和我司技術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情(qing)況，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能再(zai)用(yong)來培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新(xin)配(pei)制的(de)培養(yang)基來培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。