L Wnt-3A小鼠(shu)皮(pi)下結(jie)締組織細胞(bao)

公司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研研(yan)究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消化，再輕輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹(yi)、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止消化，輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進(jin)行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫盒可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培養凍存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體(ti)操作(zuo)步驟以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細胞懸液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後將所(suo)有細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適量培養基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天換液(ye)並檢查細胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使(shi)消化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱(xiang)中消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然後在顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞消化情況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的含8 mL培養基(ji)的新皿(min)中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便下次(ci)拿取(qu)。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：

Phospho-MAPKAPK2 (Thr222)： 0酸化(hua)原(yuan)活化蛋白(bai)激(ji)酶活化的蛋(dan)白(bai)激(ji)酶2抗(kang)體(ti) 人(ren)骨(gu)骼(ge)肌(ji)細胞裂解物(wu)HSkMCL

PK(15)豬腎(shen)上皮(pi)細(xi)胞(bao) PK (15) of porcine kidney epithelial cells MEM+10% FBS 大(da)鼠脫(tuo)氧(yang)酚/脫(tuo)氧(yang)啉(DPD)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 TLR-9/CD289  大(da)鼠Toll樣(yang)受(shou)體(ti)9 96T

Phospho-MAPKAPK2(Thr334)： 0酸化(hua)原(yuan)活化蛋白(bai)激(ji)酶活化的蛋(dan)白(bai)激(ji)酶2抗(kang)體(ti) HA Others H5N1 甲型(xing)流(liu)感(gan) H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對照)

CL-0215SK-OV-3(人(ren)卵(luan)巢(chao)癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠脫(tuo)氧(yang)酚(DPD)ELISA試(shi)劑(ji)盒 TGF Beta2(Mouse transforming growth factor Beta2)  小鼠轉(zhuan)化生長(chang)因(yin)子β2 96T

Phospho-MARCKS (Ser152 + Ser156)： 0酸化(hua)蛋白(bai)激(ji)酶C底(di)物(wu)Marcks抗(kang)體(ti) tTA基(ji)因(yin)修飾的小(xiao)鼠(shu)畸(ji)胎瘤細(xi)胞(bao)(B類);P19-CAG-tTA-1F3

HFTF細胞(bao)，人(ren)胚胎(tai)眼(yan)Tenon's囊成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao) 遲緩(huan)真桿菌/遲緩埃格(ge)特菌 小耳豬肺(fei)細(xi)胞(bao);SEP-L2 人(ren)二(er)醇(chun)(SDA)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Integrin alpha E2 peptide 整合(he)素alpha E2抗(kang)原(yuan) 0.5mg

IL-6R alpha： 白細(xi)胞介(jie)素6受(shou)體(ti)α/IL-6Rα抗(kang)體(ti) L1CAM Others Human 人(ren) CD171 / NCAML1 / L1CAM 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對照)

小鼠(shu)胚胎(tai)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao);MEF 人(ren)二(er)(MDA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18) 巨噬細(xi)胞表面分子抗(kang)原(yuan) 0.5mg

IL-9： 白介(jie)素9抗(kang)體(ti) EB病毒(du)轉(zhuan)化的人(ren)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞;KMY1036

P19(小鼠(shu)畸(ji)胎瘤細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 野(ye)豬(zhu) (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對照) 人(ren)表皮(pi)細(xi)胞(bao)活化肽因(yin)子(CAPF)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 Mafa(avian)(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A) v-maf 肌腱膜纖(xian)維(wei)肉(rou)瘤(liu)癌基(ji)因(yin)同源物A抗(kang)原(yuan) 0.5mg

L Wnt-3A小鼠(shu)皮(pi)下結(jie)締組織細胞(bao)F13B Others Human 人(ren) F13B / Coagulation factor XIII B chain 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對照) 大(da)鼠促(cu)腎(shen)上皮(pi)質(zhi)激(ji)素釋(shi)放(fang)激(ji)素(CRH)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 LPS(Human Lipopolysaccharides)  人(ren)脂多糖(tang)/內毒素 96T

RCL： c-Myc應答(da)蛋白(bai)抗(kang)體(ti) 中國倉鼠卵(luan)巢(chao)細(xi)胞(亞系(xi)克(ke)隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)

CL-0426RKO-E6(人(ren)結(jie)腸癌轉(zhuan)基(ji)因(yin)細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠促(cu)泌(mi)素(SCGN)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Human preptin  人(ren)preptin 96T

RAB6B： RAS癌基(ji)因(yin)相關蛋(dan)白(bai)RAB6B抗(kang)體(ti) ICAM3 Others Human 人(ren) CD50 / ICAM3 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽性對照)

人(ren)淋(lin)巴(ba)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)RNAHLF miRNA5 μg 大(da)鼠促(cu)卵(luan)泡(pao)素(FSH)ELISA試(shi)劑(ji)盒 PPAR- Alpha(Human peroxisome proliferators activator receptors alpha)  人(ren)過(guo)氧(yang)化物酶體(ti)增殖(zhi)物(wu)激(ji)活受體(ti)α 96T

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後首先觀察細胞瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀細(xi)胞說明(ming)書，了解細(xi)胞相關信息，如細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用培養基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確保細胞培養條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於培(pei)養條件(jian)不壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表面，顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞由於溫度(du) 變化(hua)及劇烈碰亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消毒瓶(ping)壁將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養。

5. 請客(ke)戶用相同條件(jian)的培(pei)養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後前 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技術部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)於運(yun)輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細胞(bao)會出(chu)現不穩(wen)定的情況，請及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞 的具(ju)體(ti)情況，以便我(wo)們的技術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問題解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再用來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按(an)照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞(bao)培 養條件(jian)新配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹(yi)次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。