COLO320HSR細(xi)胞

公司產品僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消(xiao)化，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的(de)培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後加(jia)入培養(yang)液終(zhong)

止消(xiao)化，輕輕吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於凍存管中；

4）先將細(xi)胞凍存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存。使用(yong)程序

降溫(wen)盒可直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以下細(xi)胞培養(yang)凍存處(chu)理(li)僅(jin)供參(can)考，具體操作步驟(zhou)以隨貨(huo)產品說(shuo)明書(shu)為主。將含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜）。第(di)二(er)天換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化液浸潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部分變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作臺，輕敲幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中或(huo)者瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存：待(dai)細(xi)胞生長狀態(tai)良好時(shi)，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養(yang)液，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數。

b、根據細(xi)胞數量加入無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存液，使細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存管做好標識。將凍存管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存管位置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：

細(xi)菌過氧(yang)化氫(qing)（HYDROGEN PEROXIDE）活(huo)性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

同位(wei)素（酶切產(chan)物(wu)）蛋(dan)白(bai)結(jie)合(he)甲(jia)基(ji)化(hua)幹擾足(zu)跡法分析(xi)試(shi)劑(ji)盒

HHV6（HUMAN HERPESVIRUS 6）病(bing)毒(du)

冰凍切片(pian)組織TNF BETA蛋(dan)白(bai)表達(da)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

通用型亞(ya)鹽熒(ying)光定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

冰凍切片(pian)半(ban)-8（CASPASE-8）活(huo)性原(yuan)位(wei)熒(ying)光染(ran)色(se)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

細(xi)胞RCT激酶活(huo)性定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒（A/B/C）

?載玻(bo)片(pian)細(xi)胞細(xi)胞有(you)絲分(fen)裂熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

冰凍切片(pian)蘇木(mu)素伊紅染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)盒

組織長(chang)鏈(lian)酮(tong)脂酰(xian)硫解(jie)酶（KETOACYL COA THIOLASE）活(huo)性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

冰凍切片(pian)紅（RUBEANIC ACID）銅(tong)染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)盒

水源樣品(pin)微(wei)囊(nang)藻(zao)毒(du)素（Microcystin）比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

載玻(bo)片(pian)細(xi)胞RyR受體蛋(dan)白(bai)表達(da)NBT顯色(se)光學顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

無脊(ji)椎動(dong)物(wu)和(he)昆蟲組織基(ji)質(zhi)金(jin)屬(shu)（MMP）總活(huo)性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

動(dong)物(wu)腎上(shang)腺組織細(xi)胞分離(li)培(pei)養(yang)試劑(ji)盒

早(zao)老(lao)素穩定(ding)因(yin)子(zi)樣(yang)蛋(dan)白(bai)/γ分泌酶組件(jian)蛋(dan)白(bai)APH1抗(kang)體(ti)

鈣粘蛋(dan)白(bai)29抗(kang)體(ti)

驅動(dong)蛋(dan)白(bai)家族成(cheng)員(yuan)21A抗(kang)體(ti)

JNK/ SAPK抑(yi)制(zhi)激酶抗(kang)體(ti)

細(xi)胞骨(gu)架(jia)連(lian)接質膜蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

ZC3H13蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

跨(kua)膜蛋(dan)白(bai)85抗(kang)體(ti)

COLO320HSR細(xi)胞APC標(biao)記(ji)小鼠CD107b單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)

鋅(xin)指蛋(dan)白(bai)783抗(kang)體(ti)

三(san)、培養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首先觀察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否完(wan)好，培(pei)養(yang)液是(shi)否有(you)漏液(ye)、渾濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及時和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因(yin)運輸問題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細(xi)胞狀態(tai)後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞，並接種(zhong)到新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件的(de)培養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞培養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞狀態(tai)，便於(yu)和(he)我司技術部溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於(yu)運輸的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞會出現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具體情況，以便我(wo)們的(de)技術人員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科研(yan)使用(yong)。

8. 備註：運輸用的(de)培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條件(jian)新配(pei)制的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。