ChaGo-K-1細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研(yan)究(jiu)使用(yong)、不得(de)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使之脫落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱中(zhong)培養；

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液(ye)終

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞使之脫落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保存。使用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞培養凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明書為主。將含有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍存管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞懸液(ye)加入含適量(liang)培養基(ji)的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞懸液(ye)加入10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄去(qu)培養上(shang)清，用(yong)不含鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將培養瓶(ping)置於(yu)37℃培養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿(na)回操(cao)作臺，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養基(ji)終止(zhi)消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸液(ye)按1:2比(bi)例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時，可(ke)進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養液(ye)，裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄盡PBS，進行(xing)細(xi)胞計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量(liang)加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞凍存液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存管凍存1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存管做好標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄凍存管位置以便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產(chan)品：

體(ti)液(ye)單(dan)胺氧(yang)化(hua)酶(mei)B型(xing)（MAO－B）活(huo)性(xing)熒光(guang)定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒

化(hua)學(xue)底(di)物(wu)復合試劑盒

體(ti)液(ye)WNV（WEST NILE）病(bing)毒(du)定(ding)性(xing)檢(jian)測試劑盒

細(xi)胞TNF ALPHA蛋(dan)白(bai)表達流(liu)式細(xi)胞儀(yi)檢(jian)測試劑盒

飲料(liao)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)半(ban)-1（CASPASE-1）活(huo)性(xing)原(yuan)位熒光(guang)染色檢(jian)測試劑盒

細(xi)胞LYNA激酶活性(xing)定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒（A/B/C）

酵(jiao)母(mu)細(xi)胞周期(qi)G0期(qi)同步（SYNCHRONY）處(chu)理(li)試劑盒

細(xi)胞/組(zu)織(zhi)白(bai)蛋(dan)白(bai)載玻(bo)片(pian)制(zhi)備(bei)試劑盒

組(zu)織(zhi)短(duan)鏈(lian)烯脂酰(xian)水合酶(mei)（ENOYL COA HYDRATASE）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒

細(xi)胞頂體酶(mei)（acrosin）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量(liang)試劑盒

細(xi)胞色素(su)P450亞酶(mei)2C18（DICLOFENAC）活(huo)性(xing)高效(xiao)液相色(se)譜法(fa)（HPLC）定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒

冰(bing)凍(dong)切(qie)片(pian)組(zu)織(zhi)鈣(gai)鈉交換體（NCX）蛋(dan)白(bai)表達熒光(guang)顯微鏡檢(jian)測試劑盒

細(xi)胞基(ji)質(zhi)金(jin)屬(shu)抑(yi)制(zhi)劑2（TIMP-2）活(huo)性(xing)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測試劑盒

胚胎(tai)幹細(xi)胞未(wei)分(fen)化(hua)定(ding)性(xing)熒光(guang)檢(jian)測試劑盒

載脂蛋(dan)白(bai)J（APOJ）抗(kang)體(ti)

鈣(gai)依(yi)賴膜(mo)結(jie)合蛋(dan)白(bai)Copine蛋(dan)白(bai)2抗(kang)體(ti)

驅(qu)動(dong)蛋(dan)白(bai)KIF5B抗(kang)體(ti)

I型(xing)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)/膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)1/1型(xing)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)/I型(xing)膠(jiao)原(yuan)a1抗(kang)體(ti)

細(xi)胞分(fen)裂(lie)周(zhou)期(qi)同源蛋(dan)白(bai)40抗(kang)體(ti)

X染色體(ti)開放(fang)閱讀(du)框57抗(kang)體(ti)

跨膜(mo)蛋(dan)白(bai)30A抗(kang)體(ti)

ChaGo-K-1細(xi)胞APC標(biao)記(ji)人CD79a單克隆(long)抗體

鋅指蛋(dan)白(bai)770抗(kang)體

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先觀察(cha)細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是(shi)否(fou)有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述(shu)現象 發生請(qing)及時和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說明書，了(le)解(jie)細(xi)胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形態(tai)、所用(yong)培養基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所需 細(xi)胞因子等(deng)，確(que)保細(xi)胞培養條(tiao)件壹致，若由(you)於(yu)培養條(tiao)件不壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞出現問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細(xi)胞瓶表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象。觀察好細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消化(hua)，懸浮細(xi)胞直接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的(de)培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相同條件的培養基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司技(ji)術(shu)部(bu)溝通 交流(liu)。由於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別敏(min)感(gan)細(xi)胞會出現不穩(wen)定(ding)的情(qing)況，請(qing)及時和(he)我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具體(ti)情(qing)況，以便我們的技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的培養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不能(neng)再(zai)用來培養細(xi)胞，請(qing)換用按照說明書細(xi)胞培 養條(tiao)件新(xin)配制(zhi)的(de)培養基(ji)來培養細(xi)胞。     收到細(xi)胞後(hou)第壹次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。