BRL-3A大鼠(shu)肝(gan)細(xi)胞

公司(si)產品(pin)僅供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得用於臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行分瓶傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱中培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化，輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置於(yu)凍存管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液氮中進(jin)行長(chang)期(qi)保存。使用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養(yang)凍存處理(li)僅供(gong)參考，具(ju)體(ti)操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴中迅速搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量培養(yang)基的培養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天換液並檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果細(xi)胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

    a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使消化液浸潤所有細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中消化1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後在顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部分變圓並脫(tuo)落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。        

     c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比例(li)分到新的(de)含8 mL培養(yang)基的新皿(min)中或者瓶中，置於培養(yang)箱中培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培養(yang)液，裝入無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

     b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做好標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉入(ru)液氮灌儲存。記錄凍存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿(na)取。  

公(gong)司(si)正在出售的產品(pin)：

小(xiao)鼠(shu)晶狀(zhuang)體(ti)上(shang)皮細(xi)胞培養(yang)基 100mL 大鼠(shu)前(qian)列腺素E2合(he)成(cheng)酶(mei)(PGES)ELISA試(shi)劑盒(he) U-TSH  大鼠(shu)高(gao)靈(ling)敏度促(cu)甲狀(zhuang)腺激素 96T

Nanog： 胚(pei)胎(tai)幹細(xi)胞關(guan)鍵蛋(dan)白(bai)抗體(ti) FRhK-4細(xi)胞，恒(heng)河(he)猴胚腎(shen)細(xi)胞 人(ren)胚胎(tai)胰腺組織來(lai)源(yuan)細(xi)胞,CCC-HPE-2細(xi)胞 CM-M064小(xiao)鼠(shu)前列(lie)腺上(shang)皮細(xi)胞培養(yang)基100mL

KIR2DL1 Others Human 人(ren) KIR2DL1 / CD158a 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 大鼠(shu)前(qian)列腺素E2(PGE2)ELISA試(shi)劑盒(he) Cys-C(Mouse Cystatin C)  小(xiao)鼠半(ban)胱酸蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑/胱抑(yi)素(su)C 96T

NAP1L1： 核小(xiao)體(ti)組裝蛋(dan)白(bai)1抗體(ti) 直(zhi)腸癌組織源(yuan)性原代細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml)/1ml

OPM-2-UBC-EGFP(穩定株)人(ren)骨髓(sui)瘤細(xi)胞 OPM-2-UBC-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱(re)滅(mie)活) 大鼠(shu)前(qian)列腺素E2(PGE2)ELISA 試(shi)劑盒(he) MSH(Human melanocyte stimulating hormone)  人(ren)黑(hei)色素細(xi)胞刺(ci)激(ji)素 96T

KIT Others Rat 大鼠(shu) KIT / c-KIT 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 犬(quan)(FA)ELISA 試(shi)劑盒(he) Insulin Receptor(ISR) 胰(yi)島(dao)素受體(ti)(抗原(yuan)) 0.5mg

H1N1 Hemagglutinin 2： 甲(jia)型(xing)流感(gan)病毒血凝素抗體(ti) tTA基(ji)因修(xiu)飾的小(xiao)鼠(shu)畸胎(tai)瘤細(xi)胞(B類(lei));P19-CAG-tTA-3C3

VERO E6細(xi)胞，猴腎(shen)細(xi)胞系(xi) Lec1(卵巢細(xi)胞) 小(xiao)鼠(shu)結締組織L細(xi)胞株929克隆(long);L-929 [L929] 犬(quan)血栓(shuan)調(tiao)節(jie)蛋(dan)白(bai)(TM)ELISA 試(shi)劑盒(he) Integrin Alpha 4/ITGA4(Integrin alpha 4) 整合(he)素-α(抗原(yuan)) 0.5ml

H1N1 Hemagglutinin 1： 甲(jia)型(xing)流感(gan)病毒血凝素抗體(ti) CPA1 Others Mouse 小(xiao)鼠 CPA1 / CPA / Carboxypeptidase A1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao))

人(ren)真皮成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞-胎(tai)兒總RNAHDF-f NA 犬(quan)血栓(shuan)素B2(TXB2)ELISA 試(shi)劑盒(he) LDL-R(Low-density lipoprotein receptor precursor) 低(di)密度脂蛋(dan)白(bai)受體(ti)(抗原(yuan)) 0.5mg

BRL-3A大鼠(shu)肝(gan)細(xi)胞RASSF4： Ras相(xiang)關區(qu)域家族(zu)蛋(dan)白(bai)4抗體(ti) A673細(xi)胞，橫(heng)紋(wen)肌癌細(xi)胞 人(ren)巨核細(xi)胞保白血病細(xi)胞,Dami細(xi)胞 人(ren)惡(e)性多發性畸胎(tai)瘤細(xi)胞;ERA-2

OMG Others Human 人(ren) OMG / OMGP (aa 1-416) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao)) 大鼠(shu)β-防禦(yu)素(β-Defensins)ELISA試(shi)劑盒(he) sVE-Cadherin (Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex)  人(ren)血管(guan)內皮鈣(gai)粘(zhan)著蛋(dan)白(bai)復(fu)合(he)體(ti) 96T

RPUSD2： RNA尿苷酸合(he)酶結構(gou)域蛋(dan)白(bai)2抗體(ti) 人(ren)胚肺二(er)倍體(ti)細(xi)胞;KMB-17

CM-M062小(xiao)鼠(shu)腎(shen)小管(guan)上(shang)皮細(xi)胞培養(yang)基100mL 大鼠(shu)β-防禦(yu)素(β-Defensins)ELISA 試(shi)劑盒(he) Alpha-SMA(Human Alpha-Smooth muscle actin)  人(ren)α平滑(hua)肌肌動蛋(dan)白(bai) 96T

RNF14： 環(huan)指蛋(dan)白(bai)14抗體(ti) PVR Others Mouse 小(xiao)鼠 CD155 / PVR 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對照(zhao))

三(san)、培養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞後首先(xian)觀察細(xi)胞瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液是否(fou)有漏液、渾濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形(xing)態、所用(yong)培養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所需 細(xi)胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由(you)於培養(yang)條件(jian)不(bu)壹(yi)致而導致細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責任由 客戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問題，部分細(xi)胞由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化及劇烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正常現(xian)象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮的(de)培養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接種到新的(de)培養(yang)瓶或培養(yang)皿中，置於培養(yang)箱中進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培養(yang)基用於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶(hu)收到細(xi)胞後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個別(bie)敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至問題解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅供(gong)科研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的(de)培養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不能再(zai)用來(lai)培養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按照(zhao)說明書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。