隨著(zhe)實驗(yan)室(shi)細(xi)胞培養(yang)的(de)發展(zhan)，除了(le)原代(dai)培養(yang)之(zhi)外(wai)，人(ren)工(gong)開發出來的(de)細(xi)胞系的(de)保存(cun)越重(zhong)要(yao)。冷(leng)凍(dong)保存(cun)細胞系的(de)優(you)點如(ru)下(xia)：
 

　　1、減少基(ji)因漂(piao)移(yi)；
 

　　2、減緩(huan)細胞系的(de)衰(shuai)老(lao)；
 

　　3、穩定表型(xing)；
 

　　4、減少(shao)微(wei)生(sheng)物(wu)汙染及(ji)交(jiao)叉汙(wu)染機(ji)會(hui)等。細胞冷凍(dong)的(de)原理在於(yu)盡可(ke)能降(jiang)低細胞內的(de)晶(jing)體形成，減少細(xi)胞內水凝固所形成的(de)高濃度(du)溶質對細胞造成的(de)低溫損(sun)傷(shang)，從提(ti)高細胞復(fu)蘇時(shi)的(de)存(cun)活率(lv)。細(xi)胞凍(dong)存(cun)的(de)數(shu)量應(ying)保證復(fu)蘇時(shi)低溫保護(hu)劑(ji)獲稀(xi)釋(shi)，稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)細(xi)胞濃度(du)扔高於正(zheng)常傳(chuan)代(dai)的(de)細(xi)胞濃度(du)為宜，這(zhe)是(shi)因為(wei)當低溫保護(hu)劑(ji)稀釋(shi)以(yi)後(hou)，該(gai)濃(nong)度(du)壹般不會(hui)對細(xi)胞造成毒性(xing)損(sun)傷(shang)。通用細胞凍(dong)存(cun)液主(zhu)要由(you)FBS、DMSO等組成，是(shi)非(fei)常經典的(de)壹種無菌(jun)凍(dong)存(cun)液。用於各(ge)種哺乳(ru)動(dong)物(wu)原代(dai)細胞、傳代(dai)細胞系、雜交(jiao)瘤細(xi)胞等的(de)凍(dong)存(cun)。
 

　　操作步(bu)驟：
 

　　1、培養(yang)細(xi)胞至(zhi)對(dui)數生(sheng)長(chang)晚(wan)起，顯(xian)微鏡觀(guan)察其外觀、形態、有(you)無汙染等，取狀(zhuang)態良(liang)好(hao)的(de)細(xi)胞進行凍(dong)存(cun)操作。如(ru)為(wei)貼(tie)壁生(sheng)長(chang)細(xi)胞，用yi蛋白酶消(xiao)化(hua)並用全(quan)培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，進行細胞計數；如(ru)為懸(xuan)浮生(sheng)長(chang)細(xi)胞，進行細胞計數。
 

　　2、離(li)心，棄(qi)上清。
 

　　3、加(jia)入適(shi)量的(de)通(tong)用細胞凍(dong)存(cun)液，重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，使細胞濃度(du)達(da)到、ml，置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)，密(mi)封，不要(yao)擰(ning)的(de)太(tai)緊，避(bi)免彎(wan)曲變形。
 

　　4、壹般進行凍(dong)存(cun)。亦可(ke)采用-20℃30min，-70℃過夜，最(zui)後(hou)置於(yu)液氮罐中(zhong)長(chang)期(qi)存(cun)儲。
 

　　註(zhu)意(yi)事項(xiang)：
 

　　1、註(zhu)意(yi)在超(chao)凈(jing)工(gong)作臺(tai)內無菌(jun)操作(zuo)，盡量避(bi)免汙(wu)染。
 

　　2、初(chu)次使(shi)用融化(hua)後(hou)可(ke)在4℃保存(cun)1個(ge)月，單(dan)應(ying)減(jian)少(shao)反(fan)復(fu)凍(dong)融的(de)次(ci)數(shu)，以(yi)免(mian)失效(xiao)。
 

　　3、雜交(jiao)瘤細(xi)胞凍(dong)存(cun)時(shi)應(ying)定期(qi)復(fu)蘇，檢查細(xi)胞的(de)活性(xing)和分(fen)泌(mi)抗體的(de)穩定性(xing)。
 

　　4、為了(le)您的(de)安(an)全(quan)和健(jian)康，請穿(chuan)實(shi)驗服並戴壹次性(xing)手套操作。