抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應是(shi)指(zhi)抗(kang)原(yuan)與(yu)相(xiang)應抗(kang)體之間所(suo)發(fa)生(sheng)的特(te)異(yi)性結合(he)反(fan)應。這種反(fan)應既(ji)可(ke)在機(ji)體內進(jin)行(xing),也(ye)可(ke)以(yi)在機(ji)體外進(jin)行(xing)。特點(dian)有(you)特異性、比(bi)例(li)性(xing)、可(ke)逆(ni)性(xing)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應的(de)過(guo)程是(shi)經(jing)過壹(yi)系(xi)列的化學和(he)物(wu)理變(bian)化,包括抗(kang)原(yuan)抗(kang)體特異(yi)性結合(he)和(he)非特(te)異性促凝聚兩個(ge)階段,以及(ji)由(you)親水(shui)膠(jiao)體轉為(wei)疏(shu)水(shui)膠(jiao)體的變(bian)化。抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應的(de)特(te)點(dian)主要(yao)有(you)三(san)性(xing):即特異(yi)性(xing)、比(bi)例(li)性(xing)、可(ke)逆(ni)性(xing)。特(te)異(yi)性是(shi)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應的(de)最(zui)主要(yao)特征,這種特異性(xing)是(shi)由(you)抗(kang)原(yuan)決定(ding)簇和(he)抗(kang)體分(fen)子的(de)超(chao)變(bian)區之間空(kong)間結構(gou)的(de)互補性確定(ding)的。
抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應的(de)主要(yao)特點(dian):
1、特異(yi)性:特定(ding)的抗(kang)體只能(neng)與(yu)特定(ding)的抗(kang)原(yuan)(肽段/蛋(dan)白(bai))結合(he),這在WB壹(yi)抗(kang)二(er)抗(kang)的(de)種(zhong)屬(shu)及(ji)反(fan)應性(xing)的(de)選擇(ze)常(chang)用(yong)到(dao);
2、可(ke)逆(ni)性(xing):抗(kang)原(yuan)抗(kang)體的結合(he)是(shi)非(fei)共(gong)價(jia)結合(he),在壹(yi)定(ding)條件(jian)下(xia)這種非共價(jia)結合(he)是(shi)可(ke)逆(ni)的(de);因此(ci),同(tong)壹(yi)NC膜(mo)/PVDF膜(mo)在Stripping(抗(kang)體洗(xi)脫(tuo))以後可(ke)以(yi)用(yong)來(lai)檢(jian)測(ce)其(qi)他(ta)蛋白(bai);
3、比(bi)例(li)性(xing):抗(kang)原(yuan)抗(kang)體在整個(ge)反(fan)應中(zhong)存在壹(yi)定(ding)的量比(bi)關系(xi),只有(you)當二者濃(nong)度(du)比(bi)例(li)適(shi)當時(shi)才出現可(ke)見(jian)反(fan)應;WB中(zhong)蛋(dan)白上樣量和(he)壹(yi)抗(kang)二(er)抗(kang)的(de)稀(xi)釋(shi)比(bi)例(li)與(yu)此有(you)關,實際操作中抗(kang)體的量相(xiang)對較多,這也(ye)是(shi)為(wei)何抗(kang)體可(ke)以(yi)反(fan)復(fu)使(shi)用的(de)原(yuan)因之(zhi)壹(yi);
4、階段性:抗(kang)原(yuan)抗(kang)體特異(yi)性反(fan)應分(fen)兩階段,第壹(yi)階段反(fan)應迅(xun)速,第二階段反(fan)應緩(huan)慢,兩階段均為特(te)異(yi)性(xing)結合(he);WB中(zhong)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體結合(he)在室溫(wen)下(xia),反(fan)應1小時(shi)結合(he)率(lv)可(ke)達(da)95%,2小時(shi)可(ke)達(da)97%以(yi)上;4℃在,反(fan)應4-6小時(shi)可(ke)達(da)90%,8小時(shi)可(ke)達(da)95%(本人忘記了具(ju)體的數(shu)值(zhi),但大致如此(ci))。
影(ying)響抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應的(de)三(san)因素:
1、電(dian)解(jie)質:抗(kang)原(yuan)和(he)抗(kang)體通常(chang)為(wei)蛋(dan)白(bai)質分(fen)子,等電點(dian)分(fen)別為(wei)pH 3~5和(he)pH 5~6,在中性(xing)或(huo):弱(ruo)堿性(xing)的環(huan)境(jing)中(zhong),表(biao)面(mian)均(jun)帶(dai)負電荷(he),適(shi)當濃(nong)度(du)的電解(jie)質會(hui)使(shi)他(ta)們失去壹(yi)部(bu)分(fen)負電荷(he)而(er)相(xiang)互結合(he),出(chu)現肉眼可(ke)見(jian)的(de)凝(ning)集(ji)或(huo)沈(chen)澱現象(xiang):在抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應中(zhong),常(chang)用(yong)0.85%的(de)NaCI溶(rong)液或(huo)各(ge)種緩(huan)沖(chong)液(ye)作為抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體的稀(xi)釋(shi)液,以(yi)提供適(shi)當濃(nong)度(du)的電解(jie)質。
2、溫(wen)度(du):抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應必(bi)須(xu)在適(shi)宜(yi)的溫(wen)度(du)中進(jin)行(xing),壹(yi)般(ban)為(wei)15~40℃,通常(chang)最(zui)適(shi)為37℃。壹(yi)定(ding)範(fan)圍(wei)內,溫(wen)度(du)升高,可(ke)促(cu)進(jin)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體分(fen)子問(wen)的(de)碰撞(zhuang)機(ji)會,加速抗(kang)原(yuan)抗(kang)體復合(he)物(wu)的(de)形成(cheng),加快可(ke)見(jian)反(fan)應的(de)速度(du),若(ruo)溫(wen)度(du)高於(yu)56℃,可(ke)導(dao)致已(yi)結合(he)的(de)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體再解(jie)離,甚(shen)至(zhi)變(bian)性(xing)或(huo)破(po)壞;溫(wen)度(du)越(yue)低(di),結合(he)速度(du)越(yue)慢,但結合(he)牢(lao)固,易於(yu)觀察。某些(xie)特殊(shu)的(de)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應,對(dui)反(fan)應溫(wen)度(du)有(you)特殊(shu)要(yao)求,如冷(leng)凝集素在4℃左右(you)與(yu)紅細胞(bao)結合(he)最(zui)好,20℃以(yi)上反(fan)而(er)解(jie)離。3、
3、酸(suan)堿度(du):抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應必(bi)須(xu)在合(he)適(shi)的酸(suan)堿度(du)環境(jing)中(zhong)進(jin)行(xing),pH過高(gao)或(huo)過(guo)低(di)都將影(ying)響抗(kang)原(yuan):抗(kang)體的理化性(xing)質(zhi),抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應的(de)最(zui)適(shi)酸(suan)堿度(du)為pH 6~8。此(ci)外,當pH達(da)到(dao)或(huo)接(jie)近顆粒性抗(kang)原(yuan)的等電點(dian)時(shi),即使(shi)沒有(you)相(xiang)應抗(kang)體存在時(shi),也(ye)會(hui)引起抗(kang)原(yuan)非特異(yi)性(xing)凝集,即自(zi)凝(ning),造(zao)成(cheng)假(jia)陽(yang)性(xing)反(fan)應,嚴重影(ying)響試驗的可(ke)靠(kao)性(xing)。