BT-B人宮(gong)頸癌(ai)細胞

公司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中的(de)培養液，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終止(zhi)消化，再(zai)輕輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培(pei)養；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中的(de)培養液，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓後加(jia)入培(pei)養液終

止(zhi)消化，輕輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並放置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮中進(jin)行長期(qi)保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養凍(dong)存(cun)處理僅(jin)供參考(kao)，具(ju)體操作(zuo)步驟(zhou)以隨貨產品(pin)說明書為主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混(hun)合均勻。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻。然後將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加(jia)入含(han)適量培養基的培養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜（或將細胞懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液並檢查細胞密度(du)。

2) 細胞傳代(dai)：如果細胞密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培(pei)養。

    a、棄去(qu)培養上(shang)清，用不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消化液浸潤所有細胞，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中消化1-2 min（視細胞情況而定(ding)），然後在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞消化情況，若細胞大部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終止(zhi)消化。輕輕(qing)打勻後裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液後吹(chui)勻。        

     c、將細胞懸(xuan)液按1:2比例(li)分到新的含(han)8 mL培(pei)養基的新皿中或者瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行細胞計數。

     b、根(gen)據(ju)細胞數量加(jia)入無(wu)血清細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以便下(xia)次拿取。  

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：

LAR： 受(shou)體(ti)蛋白酪酸0酸酶F抗(kang)體(ti) SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌(ai)耐(nai)藥細胞株 單(dan)核細胞型淋(lin)巴瘤細胞,THP 1細胞 FaDu(人咽鱗(lin)癌(ai)細胞)

SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 人(ren)細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照) 大鼠(shu)整(zheng)合素(su)樣金(jin)屬蛋(dan)白酶17(ADAM17)ELISA試劑(ji)盒(he) Guinea IgG/RBITC 羅丹明標(biao)記豚鼠(shu)IgG 0.3ml

Phospho-5-Lipoxygenase(Ser524)： 0酸化5-脂(zhi)氧合酶抗(kang)體(ti) 大鼠(shu)小(xiao)腸(chang)隱窩上(shang)皮細胞;IEC-6

Reh人急(ji)性(xing)非B非T淋巴細胞白血病(bing) Reh human acute non B non T lymphocytic leukemia IMDM培(pei)養基(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)整(zheng)合素(su)αM型(xing)((ITG αM/CD11b)ELISA試(shi)劑盒(he) Guinea IgM/RBITC 羅丹明標(biao)記豚鼠(shu)IgM 0.3ml

LMP2： 低(di)分子質(zhi)量蛋白2抗(kang)體(ti) SERPINA7 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) SerpinA7 / TBG 人(ren)細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照)

MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]人骨肉瘤細胞 The MNNG/HOS Cl #5 human osteosarcoma cell line [R-1059-D] MEM培養基(GIBCO)+10%FBS 人抗(kang)髓(sui)鞘相(xiang)關(guan)糖蛋白抗(kang)體(ti)(MAG)ELISA 試劑盒(he) HCV-Core 丙(bing)型肝(gan)炎(yan)病(bing)毒(du)-C區(qu)(多(duo)肽) 1mg

HAND1： 心(xin)臟(zang)和神(shen)經(jing)脊衍生(sheng)蛋白1抗(kang)體(ti) 犬胸(xiong)腺(xian)細胞;cf2Th SRSV轉(zhuan)化的3T3細胞，SRSV/3T3細胞 CCC-Ca761-03細胞，小(xiao)鼠(shu)癌(ai)細胞

PNLIP Others Human 人 PNLIP 人(ren)細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照) 人抗(kang)髓(sui)0脂(zhi)抗(kang)體(ti)IgA(ai-myelin Ab)ELISA 試劑盒(he) HCV-NS1 丙(bing)型肝(gan)炎(yan)病(bing)毒(du)-NS1(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

Hexokinase II： 己(ji)糖激酶2抗(kang)體(ti) HET-1A, 人食管(guan)上(shang)皮細胞

HEB細胞，人腦(nao)膠(jiao)質(zhi)細胞株(正(zheng)常) 大腸(chang)埃希(xi)氏菌(jun) 人(ren)支氣管(guan)平滑肌(ji)細胞總RNAHBSMC NA 人(ren)抗(kang)酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA 試劑(ji)盒(he) HCV-NS3 丙(bing)型肝(gan)炎(yan)病(bing)毒(du)-NS3(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

BT-B人宮(gong)頸癌(ai)細胞Proteasome 20S alpha 3(Ser250)： 0酸化蛋白酶體PSMα3抗(kang)體(ti) 犬腎(shen)細胞;MDCK(NBL-2)

人臍(qi)帶(dai)靜(jing)脈(mai)平滑肌(ji)細胞 (HUVSMC)( 5×105 ) SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌(ai)耐(nai)藥細胞株 Human 大鼠(shu)6(KLK6)ELISA試(shi)劑盒(he) TIMP-1  大鼠(shu)基(ji)質(zhi)金屬蛋(dan)白酶抑制(zhi)因(yin)子(zi)1 96T

PDSS2： 抑癌(ai)蛋(dan)白DLP1 0.2ml

Rhesus antibody Rh HSD3B7 滋(zi)養層細胞抗(kang)原(yuan)3β7抗(kang)體(ti) 人前(qian)列(lie)腺(xian)成纖維(wei)細胞cDNAHPrF cDNA

CD40LG Protein Human 重組(zu)人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biao)簽) 大鼠(shu)5(KLK5)ELISA試(shi)劑盒(he) AAA(Human anti-albumin antibody)  人抗(kang)白蛋白抗(kang)體(ti) RP2 Others Human 人 XRP2 / RP2 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細胞裂解液 (陽性(xing)對(dui)照)

三、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後首(shou)先觀(guan)察細胞瓶(ping)是否完好(hao)，培養液是否有漏液、渾濁等現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明書，了解細胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細胞形(xing)態(tai)、所用培(pei)養基、血清比例(li)、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培養條件壹(yi)致(zhi)，若由於(yu)培(pei)養條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出現(xian)問題(ti)，責任由 客(ke)戶自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由於(yu)溫度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎形(xing)成碎片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以消化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培(pei)養基重懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到(dao)新的培(pei)養瓶(ping)或培養皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中進(jin)行培養。

5. 請客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條件的(de)培養基用於(yu)細胞培養。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾張細胞照片，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞會出(chu)現(xian)不穩定(ding)的情況，請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞 的具(ju)體情況，以便我(wo)們(men)的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用的(de)培養基 (灌(guan)液培養基) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培養細胞，請換(huan)用按照說(shuo)明書細胞培 養條件新配制(zhi)的培(pei)養基來培養細胞。     收到(dao)細胞後第壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。