C17.2小(xiao)鼠(shu)神(shen)經幹(gan)細胞

公司產(chan)品僅供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶傳代，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加(jia)入培養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入液氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期保存。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作步(bu)驟以隨(sui)貨產(chan)品說明書(shu)為主。將含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量培養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液並(bing)檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代：如果細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代培養(yang)。

    a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞大部(bu)分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。        

     c、將細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進行(xing)細胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為例；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數。

     b、根(gen)據細胞數(shu)量加(jia)入無血(xue)清細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便下次(ci)拿(na)取。  

公司正在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

NLRP7： 富(fu)含(han)亮酸(suan)重(zhong)復結(jie)構(gou)域(yu)蛋白(bai)7抗(kang)體 大鼠(shu)胸大動脈平滑肌(ji)細胞;A7r5

U14(小(xiao)鼠(shu)子(zi)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 HPAC(人(ren)胰腺(xian)癌(ai)細胞) 大鼠(shu)神(shen)經顆粒素(NG/GN)ELISA試劑盒(he) C1q rat () 大鼠(shu)補(bu)體片斷(duan)C1q 96T

NLRP9： 富(fu)含(han)亮酸(suan)重(zhong)復結(jie)構(gou)域(yu)蛋白(bai)9抗(kang)體 非(fei)洲綠(lv)猴(hou)腎(shen)細胞系(xi)/HCV-p7;Vero-HCV-p7

IL12A & IL12B Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠(shu) IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋(dan)白(bai) 大鼠(shu)神(shen)經介素U(NMU)ELISA試劑盒(he) CA-2  大鼠(shu)酶(mei)2 96T

NLRP10： 富(fu)含(han)亮酸(suan)重(zhong)復結(jie)構(gou)域(yu)蛋白(bai)10抗(kang)體 CCL17 Others Human 人(ren) CCL17 / TARC / SCYA17 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

Integrin alpha 3： 整(zheng)合(he)素α3抗(kang)體 人(ren)喉(hou)癌(ai)上(shang)皮(pi)細胞;Hep-2

STO(小(xiao)鼠(shu)胚(pei)成(cheng)纖(xian)維細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu) IL18RAP / IL1R7 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 人(ren)CXC趨化(hua)因(yin)子(zi)受(shou)體3(CXCR3)ELISA 試劑盒(he) Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗(kang)原(yuan) 0.5mg

Integrin beta 5： 整(zheng)合(he)素β5抗(kang)體 皮(pi)膚(fu)肥(fei)大細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(1ml)

CXCL12 Protein Human 重(zhong)組人(ren) CXCL12 / SDF1b 蛋白(bai) (Fc 標簽) 人(ren)CXC趨化(hua)因(yin)子(zi)受(shou)體1(CXCR1)ELISA 試劑盒(he) TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor) 促(cu)甲狀(zhuang)腺(xian)素受(shou)體抗(kang)原(yuan) 0.5mg

Integrin alpha 1： 整(zheng)合(he)素α1抗(kang)體 GAD2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) GAD65 / GAD2 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

C17.2小(xiao)鼠(shu)神(shen)經幹(gan)細胞RNF158： 心(xin)臟(zang)蛋(dan)酸酶1結合(he)蛋(dan)白(bai)/環指(zhi)蛋白(bai)158抗(kang)體 L-6TG細胞，肌(ji)母細胞 人(ren)前(qian)列腺(xian)癌(ai)細胞,JCA-1細胞 人(ren)胚(pei)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維細胞;MRC-5

IGFBP6 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) IGFBP6 / IBP-6 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素21(IL21)ELISA試劑盒(he) KLK 6(Human Kallikrein 6)  人(ren)6 96T

RNF180： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)180抗(kang)體 人(ren)腎上(shang)腺(xian)皮(pi)質癌(ai)細胞;SW-13

CL-0110HL-60(人(ren)早(zao)幼粒(li)急(ji)性白(bai)血(xue)病(bing)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素20(IL-20)ELISA試劑盒(he) FDA(Human Fructose-1,6-bisphosphate aldolase)  人(ren)果糖1,6二(er)0酸醛(quan)縮酶 96T

RNF123： 環(huan)指(zhi)蛋白(bai)123抗(kang)體 ECE2 Others Human 人(ren) ECE-2 人(ren)細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首先(xian)觀察細胞瓶(ping)是否(fou)完好，培(pei)養(yang)液(ye)是否(fou)有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解(jie)細胞相關(guan)信(xin)息，如細胞形(xing)態(tai)、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養(yang)條(tiao)件不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由於(yu)溫(wen)度 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養(yang)。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件的培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張細胞照(zhao)片，記錄細胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩定(ding)的情況(kuang)，請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞 的具體情況(kuang)，以便(bian)我們的技(ji)術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪直至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再用(yong)來(lai)培養(yang)細胞，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第壹次(ci)傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。