C666-1人鼻(bi)咽(yan)癌(ai)細胞

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不得(de)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱細胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存管中；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮中進行長期保(bao)存。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒可直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇細胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍存處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨貨產(chan)品說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管在 37℃水(shui)浴中迅速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並檢(jian)查細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如果細胞密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清(qing)，用不含鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在顯(xian)微鏡下觀(guan)察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細胞大部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌離心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待細胞生長(chang)狀態(tai)良好時(shi)，可(ke)進行細胞凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存管凍存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意凍存管做好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存。記錄(lu)凍存管位置以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

三、培(pei)養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察細胞瓶(ping)是否完(wan)好，培(pei)養(yang)液(ye)是否有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有上述(shu)現(xian)象 發生請(qing)及時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細胞形態(tai)、所用(yong)培(pei)養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所需 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培(pei)養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若由於培(pei)養(yang)條件(jian)不壹致(zhi)而導致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察細胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細胞由(you)於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混勻(yun)收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接種(zhong)到新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相(xiang)同條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細胞會出(chu)現(xian)不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細胞 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我們(men)的(de)技術人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換(huan)用按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售的(de)產品：

LH： 促(cu)黃體(ti)生成(cheng)素(su)抗(kang)體(ti) CCL20 Others Mouse 小(xiao)鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 桿狀病毒(du)-昆(kun)蟲細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao))

大鼠子宮平滑(hua)肌(ji)細胞培(pei)養(yang)基 100mL 大鼠整(zheng)合素α2(ITGα2)ELISA試劑(ji)盒 human IgM/RBITC 羅丹明標(biao)記人IgM 0.3ml

Laminin alpha 1： 層粘(zhan)蛋(dan)白α1抗(kang)體 A-375 [A375], 人惡(e)性(xing)黑素瘤(liu)細胞株(zhu) 淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細胞,U-937細胞 NCI-N87(人胃(wei)癌(ai)細胞)

IL20RB Others Rat 大鼠 IL20RB 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao)) 大鼠整(zheng)合素α2(ITGA2)ELISA試劑(ji)盒 human IgA/RBITC 羅丹明標(biao)記人IgA 0.3ml

LETM1： LETM1蛋(dan)白抗(kang)體 tTA基(ji)因修(xiu)飾的(de)小(xiao)鼠胰腺癌(ai)細胞(B類(lei));Pan02-CAG-tTA-4C5

RK1(大鼠腎(shen)細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 人抗(kang)生長(chang)激素抗(kang)體(ti)(GHAb)ELISA 試劑盒 HGV(Hepatitis G vivus) 庚(geng)型(xing)肝(gan)炎(yan)病毒(du)(抗(kang)原) 0.5mg

HAPLN2： 透(tou)明質(zhi)酸及粘(zhan)蛋(dan)白2抗(kang)體 HA Others H5N1 甲型(xing)流感 H5N1 (A/Egypt/ 3300-NAMRU3/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao))

Saos-2人成(cheng)骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞 Saos-2 human osteosarcoma cells McCOY's 5A+15%FBS 人抗(kang)腎(shen)小(xiao)球基底膜抗(kang)體(ti)(GBM)ELISA 試劑(ji)盒 HisX6 聚組(zu)酸標(biao)簽蛋(dan)白 0.5mg

HAS3： 透(tou)明質(zhi)酸合成(cheng)酶(mei)3抗(kang)體(ti) 狗腎(shen)細胞;Super Tube 胚胎(tai)成(cheng)纖(xian)維細胞，3T6-Swiss albino細胞 Hed68細胞，果(guo)子(zi)貍腎(shen)上皮細胞

GIF Others Human 人 Gasic irinsic factor / GIF 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao)) 人抗(kang)腎(shen)小(xiao)管基底膜(mo)抗(kang)體(TBM)ELISA 試劑盒 HIV gp120 艾滋病病毒(du)(抗(kang)原) 0.5mg

C666-1人鼻(bi)咽(yan)癌(ai)細胞PCDHB7： 原鈣粘(zhan)蛋(dan)白β7抗(kang)體 EM1 Others Human 人 EM1 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽性對照(zhao))

人胚肺成(cheng)纖(xian)維細胞;MRC-5 大鼠1(KLK1)ELISA試劑(ji)盒 PCA-1/Yo(Human punje cell autoantibody)  人抗(kang)浦肯(ken)野(ye)細胞抗(kang)體(ti) 犬胸(xiong)腺細胞;cf2Th

人臍(qi)帶(dai)動脈(mai)平滑肌細胞 (HUASMC)( 5×105 ) A-375 [A375], 人惡(e)性(xing)黑素瘤(liu)細胞株(zhu) Human 大鼠激素(su)敏感性脂肪酶(mei)(LIPE)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MIP-5  大鼠巨(ju)噬細胞炎(yan)癥蛋(dan)白5 96T

PAX5： 配(pei)對(dui)盒基因5抗體 人腎(shen)近曲(qu)小(xiao)管上皮細胞cDNAHRPTEpiC cDNA

TNFSF13B Protein Human 重組(zu)人 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋(dan)白 大鼠激活(huo)素A受體Ⅰ(ACVR1)ELISA試(shi)劑(ji)盒 17-OHP(Mouse 17-Hydroxyprogesterone) 小(xiao)鼠17羥(qiang)孕酮 96T