A498人腎(shen)癌(ai)細胞

公司(si)產品僅供(gong)科研研究使用、不得(de)用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養基重懸，然後(hou)按(an) 1:2 比例進行分瓶(ping)傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至培(pei)養瓶中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加(jia)入培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使之脫落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並(bing)放置於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行長期保存。使用程序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細胞：以下(xia)細胞培(pei)養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅供(gong)參(can)考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨產品說明書(shu)為主(zhu)。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸液(ye)加(jia)入含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞懸液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換液並(bing)檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai)：如果細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代(dai)培(pei)養。

    a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。        

    b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，使消化液(ye)浸潤所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻(yun)。        

     c、將(jiang)細胞懸液(ye)按(an)1:2比例分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生長狀態(tai)良(liang)好時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集細胞及(ji)細胞培(pei)養液，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞計數(shu)。

     b、根據(ju)細胞數(shu)量加(jia)入無血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做好標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以便下(xia)次拿(na)取。  

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：

Lxn/Latexin： 羧肽酶抑(yi)制劑抗體 LAMP1 Others Human 人 LAMP1 / CD107a 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

人胃(wei)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞HGSMC 大鼠(shu)腫瘤壞死(si)因子受體超家族(zu)成(cheng)員(yuan)1A(TNFRSF1A)ELISA試劑盒(he) Dog IgM/Cy3 熒(ying)光(guang)素Cy3標記狗(gou)IgM 0.1ml

LCAT： 卵(luan)0酯酰(xian)基轉(zhuan)移酶抗體 小(xiao)鼠畸胎瘤(liu)細胞;P19

BC3H1(小鼠(shu)腦(nao)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人表(biao)皮(pi)角質細胞-HEK-a 大鼠(shu)腫瘤壞死(si)因子受體超家族(zu)成(cheng)員(yuan)11A(TNFRSF11A/RANK)ELISA試劑盒(he) dog IgG/PE 熒(ying)光(guang)素PE標記狗(gou)IgG 0.1ml

LPL/PLASTIN2： 脂蛋(dan)白(bai)脂(zhi)酶抗體 CL-0057CCL-149(大鼠(shu)肺泡上(shang)皮(pi)細胞)5×106cells/瓶×2

Heparanase： 乙酰(xian)肝(gan)素酶抗體 CD200R1L Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴 CD200RLa 人細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

大鼠(shu)肺泡巨噬(shi)細胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1] 人可(ke)溶性髓系(xi)細胞觸發(fa)受體-1(sEM-1)ELISA試劑盒(he) SDF-1/CXCL12 基(ji)質細胞衍(yan)生因(yin)子(zi)1 0.5mg

Heparanase 2： 乙酰(xian)肝(gan)素酶2抗體 人肺(fei)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞;HFL1

CRFK(貓(mao)腎(shen)細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0190RAW 264.7(小(xiao)鼠(shu)單(dan)核巨噬(shi)細胞白(bai)血(xue)病細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠(shu)腎(shen)上(shang)腺(xian)嗜鉻細胞瘤細胞;PC-12 [PC12] 人可(ke)溶性瘦素受體(sLR)ELISA 試劑盒(he) ADCY1 peptide 腺(xian)苷(gan)酸環(huan)化(hua)酶(mei)1多(duo)肽抗原(yuan) 0.5mg

human serum： 人血(xue)清(qing)抗體 EB病毒轉(zhuan)化的人B淋巴細胞;KM9801

A498人腎(shen)癌(ai)細胞PGAM1： 0酸變(bian)位(wei)酶1抗體 家貓(mao)肺細胞;FCA-L1

人脂(zhi)肪(fang)細胞-內臟(zang)(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC來(lai)源), 人癌(ai)細胞 Human 大鼠(shu)結締組(zu)織(zhi)生長因子(zi)(CTGF)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) apo-B100  大鼠(shu)載(zai)脂蛋(dan)白(bai)B100 96T

PGK1： 0酸激(ji)酶1抗體 人肝(gan)竇內皮(pi)細胞總RNAHHSEC NA

TNFSF13 Protein Mouse 重組小鼠 TNFSF13 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian)) 大鼠(shu)結蛋(dan)白(bai)(Des)ELISA試(shi)劑盒(he) 16- Alpha OHE-1(Mouse 16- AlphaHydroxyestrogen 1) Hpt/HP小(xiao)鼠16α羥(qiang)基雌(ci)酮1 96T

PCB： 酸羧化(hua)酶(mei)抗體 MAPK1 Others Human 人 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲(chong)細胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照)

三、培(pei)養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到細胞後(hou)首先(xian)觀察細胞瓶是(shi)否完(wan)好，培(pei)養液是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱(yue)讀細胞說明書(shu)，了解(jie)細胞相(xiang)關(guan)信息，如細胞形態(tai)、所(suo)用培(pei)養基、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需 細胞因子(zi)等(deng)，確保細胞培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由於培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致細胞出現(xian)問(wen)題，責任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分細胞由於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀察好細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養基重懸 細胞，並(bing)接種到新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置(zhi)於培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養基用(yong)於細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細胞照片(pian)，記(ji)錄細胞狀態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司技術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的情(qing)況，請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞 的具體情(qing)況，以(yi)便(bian)我們的(de)技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科研使用。

8. 備註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再用來培(pei)養細胞，請換用按照(zhao)說明書(shu)細胞培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細胞。     收到細胞後(hou)第壹(yi)次傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。