A673人橫紋肌(ji)瘤(liu)細(xi)胞(bao)

公司(si)產品(pin)僅供科研研(yan)究(jiu)使(shi)用、不得(de)用於臨(lin)床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例(li)進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養；

2、細(xi)胞(bao)凍存：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培養液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進行長期保(bao)存。使用程序

降溫盒可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍存處理(li)僅供參(can)考，具(ju)體操作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨產品(pin)說明(ming)書為主。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培養基的(de)培養(yang)瓶中培(pei)養過夜(ye)（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代培(pei)養。

    a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清，用不含(han)鈣、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。        

    b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變圓並(bing)脫落(luo)，迅速拿(na)回操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。        

     c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀態良好時，可(ke)進行細(xi)胞(bao)凍存。下面(mian) T25 瓶為例；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離心4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

     b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存管做好標識。將(jiang)凍存管放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記錄凍存管位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。  

公司(si)正在(zai)出售的(de)產品(pin)：

LRRC4B： 神經突觸(chu)蛋(dan)白NGL3抗體(ti) CL-0033BGC823(人胃癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

FGF18 Protein Human 重(zhong)組人 FGF18 / FGF-18 蛋(dan)白 (His 標簽) 大(da)鼠中性粒細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)蛋(dan)白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試(shi)劑盒 Mouse IgG/Cy5.5 熒光素Cy5.5標記小(xiao)鼠(shu)IgG(細(xi)胞(bao)流(liu)式同(tong)型(xing)對(dui)照(zhao)) 0.1ml

LCA5L： 致盲基因(yin)LCA5樣(yang)蛋(dan)白抗體(ti) CHEK1 Others Human 人 CHK1 / CHEK1 桿狀病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

大鼠小(xiao)腸(chang)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠中(zhong)性粒細(xi)胞(bao)趨(qu)化(hua)蛋(dan)白2(NAP-2/CXCL7)ELISA 試(shi)劑盒 OVA/PE 熒光素PE標記雞卵白(bai)蛋(dan)白 0.1ml

LCA5： 致盲基因(yin)LCA5蛋(dan)白抗體(ti) GH3, 大鼠垂(chui)體(ti)生長激(ji)素(su)腺瘤(liu) 纖維(wei)肉瘤(liu)細(xi)胞(bao),HT1080細(xi)胞(bao) Jurkat,Clone E6-1(T 淋巴(ba)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病細(xi)胞(bao))

HDAC7： 組蛋(dan)白去乙(yi)酰化(hua)酶(mei)7抗體(ti) 人胚(pei)腎細(xi)胞(bao);293FT

PLC/PRF/5(人肝癌亞(ya)力山大細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 人顆粒酶B(Gzms-B)ELISA 試(shi)劑盒 DDC (DOPA decarboxylase) 多(duo)巴(ba)胺脫羧(suo)酶(mei)(抗原(yuan)) 0.5mg

phospho-HDAC7 (Ser358)： 0酸化(hua)組蛋(dan)白去乙(yi)酰化(hua)酶(mei)7抗體(ti) FSTL5 Others Human 人 FSTL5 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

腸靜(jing)脈內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml) 人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA 試(shi)劑盒 EGFR- V III 人表皮(pi)生長因(yin)子受體-8(多(duo)肽片(pian)斷抗原(yuan)) 0.5mg

HDAC8： 組蛋(dan)白去乙(yi)酰化(hua)酶(mei)8抗體(ti) 豹貓肺(fei)成纖維(wei)樣細(xi)胞(bao);LCL4 幼(you)倉鼠腎細(xi)胞(bao)，BHK細(xi)胞(bao) DCS細(xi)胞(bao)，小(xiao)鼠(shu)樹(shu)突狀細(xi)胞(bao)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao)

A673人橫紋肌(ji)瘤(liu)細(xi)胞(bao)PCLKC： 鈣粘(zhan)蛋(dan)白LKC抗體(ti) 豹貓肺(fei)成纖維(wei)樣細(xi)胞(bao);LCL2

人卵巢成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)(HOF) ( 5×105 ) NCI-N87 [N87]人胃癌(ai)細(xi)胞(bao) Human 大(da)鼠(shu)交(jiao)聯(lian)物(PY)ELISA試(shi)劑盒 sP-selectin  大鼠可溶(rong)性(xing)P選(xuan)擇(ze)素 96T

PLEKHA7： PLEKHA7蛋(dan)白抗體(ti) 人食(shi)道平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)總(zong)RNAHESMC NA

TNFSF10 Protein Cynomolgus 重(zhong)組食(shi)蟹(xie)猴 TNFSF10 / AIL / APO-2L 蛋(dan)白 大(da)鼠交(jiao)聯(lian)物(PY)ELISA 試(shi)劑盒 MDA(Mouse malondialchehyche) 小鼠丙二(er)醛(quan) 96T

PCDH21： 鈣粘(zhan)蛋(dan)白21抗體(ti) PHKG1 Others Human 人 PHKG1 桿狀病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培養液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於培(pei)養條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸問題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於溫度(du) 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常現象。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿中，置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中進行培養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培(pei)養基用於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸的原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細(xi)胞(bao)會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技術(shu)人員跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按照(zhao)說明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的培(pei)養基來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。