AC16人心(xin)肌細胞

公司(si)產品(pin)僅供科(ke)研研究使用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中進(jin)行長期保(bao)存(cun)。使用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇細(xi)胞：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作步驟以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或將細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

    a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。        

    b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。        

     c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝入無(wu)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數。

     b、根(gen)據細胞(bao)數量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存管放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液氮(dan)灌儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次拿取(qu)。  

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：

LBX1： 轉錄(lu)因子LBX1抗(kang)體(ti) 小(xiao)鼠(shu)紅(hong)白(bai)血(xue)病細胞;MEL

BT-20(人癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 人(ren)肺(fei)動脈(mai)平滑(hua)肌細胞HPASMC 大(da)鼠(shu)中(zhong)性(xing)粒(li)細胞(bao)激活(huo)蛋白(bai)3(NAP3)ELISA試劑(ji)盒(he) Rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記(ji)兔IgG(細胞流式同(tong)型(xing)對照) 0.1ml

LDB1： 神經細(xi)胞特異性(xing)轉錄(lu)因子LDB1抗(kang)體(ti) CL-0025AR42J(大(da)鼠(shu)胰(yi)腺(xian)外分(fen)泌(mi)細胞(bao))5×106cells/瓶×2

FGF21 Protein Mouse 重組小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 蛋(dan)白(bai) (His 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)中(zhong)性(xing)粒(li)細胞(bao)彈(dan)性(xing)蛋白(bai)酶(mei)(NE)ELISA試劑(ji)盒(he) Rabbit IgG/PE-Cy5 熒光(guang)素PE-Cy5標記(ji)兔IgG(細胞流式同(tong)型(xing)對照) 0.1ml

LECT2： 白(bai)細胞(bao)細胞(bao)化(hua)學(xue)吸(xi)引(yin)素(su)2抗(kang)體(ti) TLR2 Others Human 人(ren) TLR2 / CD282 (aa 1-587) 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

NDV HN protein： 雞新城(cheng)疫血(xue)凝素-神經酸(suan)酶(mei)抗體(ti) 人(ren)胚(pei)胎(tai)，皮(pi)膚(fu)，肌肉;M-22

DLD-1(人結腸(chang)腺(xian)癌細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 CL-0222SV-HUC-1(人(ren)膀胱上(shang)皮(pi)永生化細(xi)胞)5×106cells/瓶×2 中(zhong)國(guo)倉鼠(shu)卵巢細胞(bao)(亞(ya)系克(ke)隆);CHO-HCV-NS2 人抗(kang)組(zu)蛋白(bai)抗體(ti)(AHA)ELISA 試劑(ji)盒(he) Endothelin-1 (ET-1) 內(nei)皮(pi)素-1(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

HSP105： 熱休克(ke)蛋(dan)白(bai)105抗體(ti) 人(ren)胚(pei)腎(shen)細胞(亞(ya)系克(ke)隆);FIP293

Psi2 DAP(小鼠胚(pei)胎成纖維細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 人(ren)抗(kang)組(zu)蛋(dan)白(bai)(H2A-H2B)-DNA抗體(ti)/抗(kang)二(er)聚(ju)體(ti)-DNA抗(kang)體(ti)ELISA 試劑(ji)盒(he) ERAB 內(nei)質(zhi)網Aβ相(xiang)關(guan)結(jie)合(he)蛋白(bai)(抗原(yuan)) 0.5mg

HNF1： 肝細胞(bao)核(he)因子1α抗(kang)體(ti) CA4 Others Human 人(ren) Carbonic Anhydrase IV / CA4 CHO細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照)

AC16人心(xin)肌細胞PTP1B： 蛋白(bai)酪酸(suan)0酸(suan)酶(mei)-1B抗體(ti) 豹(bao)貓肺(fei)成纖維(wei)樣(yang)細(xi)胞;LCL3

人骨髓間(jian)充(chong)質(zhi)幹(gan)細胞(bao)(骨髓)(HMSC-bm)(5×105) MGC80-3(MGC-803)人胃癌(ai)細(xi)胞(bao) Human 大(da)鼠(shu)降(jiang)鈣(gai)素基(ji)因相(xiang)關(guan)肽(CGRP)ELISA 試劑(ji)盒(he) S-100B  大(da)鼠(shu)S100B蛋(dan)白(bai) 96T

PROCA1： Cyclin A1相(xiang)互(hu)作(zuo)用蛋白(bai)抗體(ti) 人(ren)外根(gen)殼(ke)細胞(bao)總RNAHHORSC NA

CD40LG Protein Mouse 重組小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)降(jiang)鈣(gai)素(CT)ELISA試劑(ji)盒(he) C-Peptide(Mouse C-Peptide) 小(xiao)鼠C肽 96T

PAG608 (3E4)： 野(ye)生型(xing)P53誘(you)導(dao)基(ji)因1單克(ke)隆抗體(ti) CLK3 Others Human 人(ren) CLK3 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照)

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完好，培(pei)養(yang)液是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾濁等現象，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明書，了解細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息，如(ru)細胞形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細胞(bao)瓶表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運(yun)輸問(wen)題，部分細(xi)胞由(you)於(yu)溫度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可以消(xiao)化(hua)，懸浮細胞(bao)直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術部溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因，個別(bie)敏感細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的具(ju)體(ti)情(qing)況，以便(bian)我(wo)們的技術人員(yuan)跟蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研使用。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用按照說(shuo)明書細(xi)胞培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到細胞後第壹次傳代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。