T4 DNA Ligase（T4連接(jie)酶(mei)）

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商(shang)品屬(shu)性

濃    度(du)： 5U/μl
產品概(gai)述(shu)：
在(zai)有(you)Mg2+和(he)ATP存在(zai)的(de)條件(jian)下，T4 DNA Ligase能催(cui)化雙鏈(lian) DNA或RNA上相鄰的5′-磷(lin)酸(suan)末端和(he)3′-羥(qiang)基(ji)末(mo)端(duan)形成(cheng)磷(lin)酸二酯(zhi)鍵。該酶(mei)不僅(jin)能夠(gou)催(cui)化雙鏈(lian)DNA的平(ping)末(mo)端(duan)或粘(zhan)性末(mo)端(duan)之間的連(lian)接(jie)，還(hai)可以修(xiu)復雙(shuang)鏈(lian) DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交(jiao)雙鏈(lian)中(zhong)的單(dan)鏈(lian)切(qie)刻，但不能催(cui)化單(dan)鏈(lian) DNA 之間的連(lian)接(jie)。
保存條件(jian)：-20℃保存。
酶(mei)儲(chu)存緩(huan)沖液(ye)：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5) ，50mM KCl，1mM DTT， 0.1mM EDTA，50% (v/v) glycerol。
5 × T4 DNA Ligase Buffer
250 mMTris-HCl (pH 7.5)， 50mM MgCl2，50mM DTT， 5mM ATP，連接(jie)促進(jin)劑。
來     源(yuan)：純(chun)化於攜帶(dai)T4 DNA ligase 基(ji)因(yin) 的E. coli 菌株。
抑(yi)制劑(ji)和(he)熱失(shi)活(huo)：
大於200mM的NaCl或KCl可以強烈抑(yi)制連(lian)接(jie)酶(mei)活(huo)性。65℃加熱 10分(fen)鐘(zhong)或70℃加熱5分(fen)鐘(zhong)即(ji)可失活(huo)。
單(dan)位(wei)定(ding)義：
在(zai)37℃，20分(fen)鐘(zhong)內交(jiao)換1 nmole 的32PPi所(suo)需(xu)要(yao)的(de)酶(mei)量定(ding)義為壹個Weiss單(dan)位(wei)。本(ben)產品酶(mei)1U(Weiss Unit)相當於200個粘(zhan)性末(mo)端(duan)單(dan)位(wei)。在(zai)T4 DNA 連(lian)接(jie)酶(mei)反應緩沖液(ye)中(zhong)，16℃條件(jian)下，30分(fen)鐘(zhong)能夠(gou)使(shi)50%的(de)經Hind III消(xiao)化的(de)λDNA 片段(duan)連接(jie)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)酶(mei)量為(wei)壹個粘(zhan)性末(mo)端(duan)單(dan)位(wei)。
質(zhi)量控(kong)制：
藍白(bai)斑分(fen)析實(shi)驗(yan)表明(ming)白斑數(shu)小於2%;過量T4 DNA Ligase 混(hun)合超螺(luo)旋(xuan)質粒(li)檢測(ce)實(shi)驗(yan)表明(ming)無核酸酶(mei)檢出；SDS-PAGE檢測(ce)重(zhong)組蛋白純(chun)度(du)大於99%。

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