HPAC人(ren)胰腺癌(ai)細胞(bao)

公司產品(pin)僅供科研研(yan)究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)！

二(er)、細胞(bao)培(pei)養操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以下細胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處理僅供參(can)考，具(ju)體操作步驟以隨貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴中迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後吹(chui)勻。然後將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適(shi)量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中培養過(guo)夜（或將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

    a、棄(qi)去培養上(shang)清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次。        

    b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將培(pei)養瓶置於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養瓶後加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹(chui)勻。        

     c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分(fen)到新的含8 mL培養基的(de)新皿中或者瓶中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

     b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存管做(zuo)好標(biao)識。將凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位置以便下(xia)次拿(na)取(qu)。  

三、培(pei)養註意事(shi)項 

1. 收到(dao)細胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察細胞(bao)瓶是(shi)否完(wan)好，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如細胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培養基、血(xue)清(qing)比(bi)例、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保(bao)細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致而導致細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問題，部分細胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培養基重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培養瓶或培養皿中，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養。

5. 請(qing)客戶用相同條件(jian)的培(pei)養基用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶收到(dao)細胞(bao)後前 3 天(tian)各拍幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部溝通 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以便我(wo)們的技(ji)術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回訪直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科研使(shi)用。

8. 備註：運輸(shu)用的培養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培養細胞(bao)，請(qing)換用按照說(shuo)明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件新配制的(de)培養基來(lai)培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公司正(zheng)在出(chu)售的(de)產品(pin)：

MRas： 原(yuan)癌(ai)基因(yin)M-ras抗(kang)體 雜交瘤(liu)(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7

NCI-H520(人(ren)肺鱗(lin)癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 A549 [A-549](肺癌(ai)細胞(bao)) 大(da)鼠(shu)心(xin)肌肌鈣蛋白C(TnC)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) MIP-1 Delta(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1 Delta)  小鼠(shu)巨噬(shi)細胞(bao)炎(yan)性(xing)蛋白1δ 96T

MCP1： 單(dan)核(he)細胞(bao)趨化蛋白1抗(kang)體 敘(xu)利(li)亞(ya)倉鼠(shu)肌肉細胞(bao);GH-M1

IL18 Protein Mouse 重(zhong)組小鼠(shu) IL18 / IL-18 蛋白 大(da)鼠(shu)心(xin)肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) L-LDH  大(da)鼠(shu)L-鼠(shu)乳酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶 96T

英(ying)文(wen)名稱： 抗(kang)體 CROT Others Human 人(ren) CROT (474 Leu/Val) 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

貓(mao)星(xing)形腦(nao)膠(jiao)質細胞(bao);PG-4(S+L-) 人(ren)泛素連接(jie)酶(E3/UBPL)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Fibulin 1 衰老(lao)關(guan)鍵蛋白抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HPV16 E6 protein： 人(ren)類狀瘤(liu)病毒(du)16抗(kang)體 EB病毒(du)轉化(hua)的(de)人(ren)B淋(lin)巴細胞(bao);KM9803

MCF-7(人(ren)癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 食蟹(xie)猴(hou) EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 人(ren)泛(fan)素結合(he)酶(E2/UBCE)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) FOS B FosB抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HIF-1 Alpha： 缺(que)氧誘導因子1α 抗(kang)體 肝(gan)細胞(bao)生(sheng)長(chang)添加物(wu)HGS

CCL13 Protein Human 重(zhong)組人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 標簽(qian)) 人(ren)泛(fan)素激活酶(E1/UBAE)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) FRA2/FOSL2(Fos related/like antigen 2) FOS樣(yang)抗(kang)原(yuan)2 0.5mg

HPAC人(ren)胰腺癌(ai)細胞(bao)Pescadillo： 雌(ci)激(ji)素受(shou)體共(gong)調(tiao)節因子抗(kang)體 大(da)額牛皮膚成(cheng)纖維樣(yang)細胞(bao);BOS-1

人(ren)胚肺二(er)倍體細胞(bao);KMB-17 人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)濾泡(pao)上(shang)皮細胞(bao)培(pei)養基 100mL 大(da)鼠(shu)反狀腺原(yuan)酸(suan)(3)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) VEGF  大(da)鼠(shu)血管內(nei)皮細胞(bao)生(sheng)長(chang)因(yin)子 96T

Persephin： PSP抗(kang)體 支(zhi)氣管上(shang)皮細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次方(fang)(1ml)

TDGF1 Protein Human 重(zhong)組人 Cripto / TDGF1 蛋白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)法(fa)尼酯(zhi)X受(shou)體(FXR)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) TNF- Alpha  大(da)鼠(shu)壞死(si)因子α 96T

Pan-ras： Pan ras抗(kang)體 AGA Others Human 人(ren) AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))