T4 DNA Ligase

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供科研研究(jiu)使(shi)用、不得用於臨床(chuang)診斷(duan)！

商(shang)品屬(shu)性

描(miao)述(shu)：

T4 DNA Ligase 可(ke)催化相鄰 DNA 鏈(lian)的 5’-P 末(mo)端(duan)和3’-OH 末(mo)端(duan)以磷(lin)酸二(er)酯鍵結(jie)合的反(fan)應(ying)，需(xu) ATP 作輔(fu)酶(mei)，不僅可(ke)以催化粘性末(mo)端(duan)之(zhi)間(jian)或平滑(hua)末(mo)端(duan)之(zhi)間(jian)的 DNA 的連接(jie)，也可(ke)以(yi)催化 DNA 與 RNA 之(zhi)間(jian)以(yi)及(ji)少數 RNA 之(zhi)間(jian)的連接(jie)。可
應(ying)用於在粘性末(mo)端(duan)或平末(mo)端(duan)連接(jie)雙鏈(lian) DNA 分子(zi)，也可應(ying)用於修補(bu)雙鏈(lian) DNA、RNA 或 DNA RNA 雜(za)交(jiao)體(ti)上(shang)的缺(que)口(kou)。

活性定(ding)義：16°C 反(fan)應(ying) 30 分(fen)鐘條(tiao)件(jian)下，使(shi) 1pmol 的粘性末(mo)端(duan)
DNA 連接(jie)所(suo)需(xu)要(yao)的酶(mei)量定(ding)義(yi)為(wei) 1Unit。
失(shi)活：65°C，10 分(fen)鐘(zhong)。
10×T4 Ligase Buffer：500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM
MgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法
1. 按以(yi)下組(zu)分(fen)配(pei)制反(fan)應(ying)體(ti)系
10×T4 Ligase Buffer 2 μl
載(zai)體(ti) 50 ng(0.2-1pmol)
插入(ru)片(pian)段 1-50 ng(0.2-10pmol)
T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
註(zhu)意：兩(liang)個(ge)片(pian)段的連接(jie)時，通常載體(ti)與插入(ru)片(pian)段的摩(mo)爾(er)比為(wei)
1:3（但該比(bi)例(li)並(bing)非嚴謹(jin)，在(zai) 1:1-1：10 範圍(wei)內(nei)均(jun)可獲得理(li)想的實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)），提(ti)取根(gen)據片(pian)段大(da)小(xiao)與濃度(du)，計(ji)算(suan)其(qi)摩(mo)爾(er)濃度(du)。
2. 如為(wei)粘末(mo)端(duan)連接(jie)反(fan)應(ying)， 22°C （16-37°C）連接(jie) 30min，
連接(jie)產(chan)物直接(jie)用於轉(zhuan)化（或凍存(cun)於-20°C）。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品：