Equi-phi29 DNA Polymerase

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷！

商(shang)品屬(shu)性

產(chan)品介(jie)紹(shao)：

Equi-phi29 DNA Polymerase 是(shi) phi29 的改造體(ti)，並經多(duo)次(ci)純(chun)化分(fen)離(li)而(er)得(de)。在(zai)保(bao)留了(le) phi29 DNA 聚合(he)酶的鏈(lian)置(zhi)換、連(lian)續合(he)成特性(xing)（>70kb）的基礎(chu)上，提(ti)高(gao)了(le)滾環(huan)擴(kuo)增的反(fan)應(ying)溫(wen)度，該酶酶(mei)可以在(zai) 42 度條件下(xia)持(chi)續的進行(xing) DNA 合(he)成（而(er) phi29 DNA 聚合酶(mei)在(zai)此(ci)溫度(du)下(xia)反(fan)應(ying)活(huo)性很(hen)低(di)）。

這(zhe)種高(gao)溫(wen)的反(fan)應(ying)特性(xing)，在(zai)以下(xia)幾(ji)個(ge)方面(mian)對(dui)實(shi)驗有(you)明(ming)顯的提升(sheng)：

（1）在(zai) NGS 測序中，其(qi)提(ti)升(sheng)了(le)高(gao) GC 含(han)量、回文(wen)結構(gou)等復雜模板的延伸(shen)能力，使(shi)得(de) NGS 的覆蓋(gai)度(du)更均(jun)壹，降(jiang)低(di)測序所(suo)需深(shen)度(du)；

（2）高(gao)溫(wen)的反(fan)應(ying)條件，提升了(le)基因(yin)組(zu) DNA的 WGA 產物(wu)的合成量，並可以進(jin)行(xing)變(bian)溫(wen)擴增；

（3）降(jiang)低(di)測序中 Gap 區(qu)域(yu)，提升(sheng)單細(xi)胞測序的數(shu)據質(zhi)量和完(wan)整(zheng)度；

（4）降(jiang)低(di)非(fei)特異性擴(kuo)增產物(wu)；

（5）提(ti)升 MDA/RCA 等實驗的擴增性能(neng)和(he)特異性。
除(chu)此(ci)外(wai)，該酶(mei)仍然(ran)具有(you)很(hen)強(qiang)的 3’→5’外(wai)切(qie)酶校(xiao)讀(du)功能，合(he)成的 DNA 片段保(bao)真性(xing)高(gao)。該(gai)酶(mei)的外(wai)切(qie)酶活(huo)性較(jiao)強(qiang)，因(yin)此(ci)合成過(guo)程(cheng)中引物(wu)需(xu)要 3’端(duan)硫代(dai)修飾，以降(jiang)低(di)外(wai)切(qie)活(huo)性對(dui)引物(wu)的切(qie)割效應(ying)。

儲(chu)存(cun)：-20℃可保(bao)存(cun) 3 年。
註(zhu)意：在(zai)不同的實驗(yan)類(lei)型中，Oligo根據實(shi)驗(yan)需要自(zi)行(xing)選擇。
2. 引物(wu)和(he)模板退(tui)火(huo)：體(ti)系配(pei)制完(wan)畢(bi)後，放置(zhi)到 PCR 儀(yi)中，95℃ 3min，25℃ 3min。3. 退(tui)火(huo)完(wan)畢(bi)後，向(xiang)退(tui)火(huo)產物(wu)中加入(ru) 1μl Equi-phi29 DNAPolymerase，混(hun)合均(jun)勻。
4. 擴增反(fan)應(ying)
4.1 恒(heng)溫擴增
對(dui)於(yu)環(huan)狀(zhuang)DNA模板采用(yong)恒(heng)溫(wen)反(fan)應(ying)作(zuo)為(wei)推薦使(shi)用(yong)30℃恒(heng)溫(wen)擴(kuo)增，30℃孵育 6~16h.該酶(mei)在(zai) 30-42℃條件下(xia)均(jun)可工(gong)作(zuo)，
必(bi)要時根據實(shi)驗(yan)類(lei)型進(jin)行調(tiao)整。
4.2 變(bian)溫(wen)擴增
對(dui)於(yu)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 或(huo) cDNA 模板，推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)變(bian)溫(wen)擴增反(fan)應(ying)，以在(zai)短時間內獲(huo)得(de)更高(gao)產(chan)量，並提(ti)高(gao)了(le)低濃度(du)模板的擴增產量。在(zai) PCR 儀上做(zuo)如下(xia)設(she)置(zhi)：
【30℃ 5min；42℃ 15s】循環(huan) 72 次(ci)（約 6h）或(huo) 120次(ci)（約 10h）.必(bi)要時，反(fan)應(ying)結束後，可於(yu) 65°C 10min 進(jin)行失活(huo)反(fan)應(ying)。
使(shi)用(yong)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
（1）必要時可單(dan)獨(du)額外(wai)添加(jia)終濃度(du) 1 mM DTT 和 0.2mg/ml BSA，可提(ti)高(gao)反(fan)應(ying)效率(lv)。
（2）該酶(mei)的反(fan)應(ying)溫(wen)度為(wei) 42 ℃ （在(zai) 30~42℃之(zhi)間均(jun)有活(huo)性）。
（3）65℃ 10min 即(ji)可使(shi)該(gai)酶失活(huo)。
（4）根據實(shi)驗(yan)類(lei)型需(xu)要，調(tiao)整dNTP的濃度(du)100~500 μM。
（5）添加 Yeast Pyrophosphatase可提(ti)高(gao) DNA 產(chan)量。
（6）反(fan)應(ying)引物(wu) 3’端(duan)的硫代(dai)修飾可避免(mian)引物(wu)降(jiang)解(jie)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的產品(pin)：