PCR反應(ying)的(de)最大(da)特點(dian)是(shi)具(ju)有(you)較大(da)擴增能(neng)力(li)與靈(ling)敏(min)性(xing),但令(ling)人(ren)頭(tou)痛(tong)的(de)問題(ti)是(shi)易汙染(ran),極(ji)其(qi)微(wei)量(liang)的(de)汙染(ran)即(ji)可(ke)造(zao)成(cheng)假陽(yang)性(xing)的(de)產生(sheng)。
壹、標本(ben)間交叉(cha)汙(wu)染
標本(ben)汙染主(zhu)要有(you)收(shou)集(ji)標本(ben)的(de)容(rong)器(qi)被汙染,或(huo)標本(ben)放置時(shi),由於(yu)密(mi)封不嚴(yan)溢(yi)於(yu)容(rong)器(qi)外,或(huo)容(rong)器(qi)外粘有(you)標 本(ben)而造成(cheng)相互(hu)間(jian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染;標本(ben)核酸模(mo)板在(zai)提(ti)取過程中,由(you)於(yu)吸(xi)樣槍汙染(ran)導(dao)致標本(ben)間汙染(ran);有(you)些(xie)微(wei)生(sheng)物(wu)標本(ben)尤其(qi)是(shi)病毒(du)可(ke)隨氣(qi)溶膠(jiao)或(huo)形成(cheng)氣(qi)溶膠(jiao)而擴散,導(dao)致彼此間(jian)的(de)汙染(ran)。
二(er)、PCR試(shi)劑(ji)的(de)汙染(ran)
主(zhu)要是(shi)由於(yu)在(zai)PCR試(shi)劑(ji)配制過程中(zhong),由(you)於(yu)加(jia)樣槍、容(rong)器(qi)、雙蒸水(shui)及其(qi)它溶(rong)液(ye)被PCR核(he)酸(suan)模板汙(wu)染。
三(san)、PCR擴增產(chan)物(wu)汙(wu)染(ran)
這(zhe)是(shi)PCR反應(ying)中最(zui)主(zhu)要最(zui)常見的(de)汙染(ran)問題(ti).因(yin)為(wei)PCR產(chan)物(wu)拷貝(bei)量(liang)大(da)(壹般為(wei)1013拷貝(bei)/ml),遠(yuan)遠(yuan)高於(yu) PCR檢(jian)測數個拷貝(bei)的(de)極限(xian),所(suo)以(yi)極微(wei)量(liang)的(de)PCR產(chan)物(wu)汙(wu)染(ran),就(jiu)可(ke)造(zao)成(cheng)假陽(yang)就可(ke)形(xing)成(cheng)假陽(yang)性(xing)。
還有(you)壹種(zhong)容(rong)易忽(hu)視,最(zui)可(ke)能(neng)造(zao)成(cheng)PCR產(chan)物(wu)汙(wu)染(ran)的(de)形式(shi)是(shi)氣(qi)溶膠(jiao)汙染(ran);在(zai)空(kong)氣(qi)與液(ye)體面(mian)摩擦(ca)時(shi)就可(ke)形(xing)成(cheng)氣(qi)溶膠(jiao),在(zai)操(cao)作時(shi)比(bi)較劇(ju)烈地(di)搖動(dong)反應(ying)管,開蓋時(shi)、吸樣(yang)時(shi)及汙(wu)染進(jin)樣(yang)槍的(de)反復(fu)吸樣(yang)都可(ke)形(xing)成(cheng)氣(qi)溶膠(jiao)而汙(wu)染(ran).據(ju)計算(suan)壹個氣(qi)溶膠(jiao)顆粒(li)可(ke)含(han)48000拷貝(bei),因而(er)由其(qi)造成(cheng)的(de)汙染(ran)是(shi)壹個值得(de)特別重(zhong)視的(de)問題(ti)。
四、實驗(yan)室(shi)中(zhong)克(ke)隆(long)質(zhi)粒的(de)汙染(ran)
在(zai)分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學實驗(yan)室(shi)及(ji)某些(xie)用克(ke)隆(long)質(zhi)粒做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)的(de)檢(jian)驗(yan)室(shi),這(zhe)個問題(ti)也(ye)比(bi)較常(chang)見.因(yin)為(wei)克(ke)隆(long)質(zhi)粒在(zai)單位(wei)容(rong)積內(nei)含(han)量(liang)相(xiang)當高,另(ling)外在(zai)純(chun)化(hua)過(guo)程(cheng)中(zhong)需(xu)用較多(duo)的(de)用具(ju)及試(shi)劑(ji),而且(qie)在(zai)活細胞(bao)內(nei)的(de)質(zhi)粒,由(you)於(yu)活(huo)細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖的(de)簡便(bian)性(xing)及(ji)具(ju)有(you)很(hen)強的(de)生(sheng)命力.其(qi)汙染(ran)可(ke)能(neng)性(xing)也(ye)很(hen)大(da).