黃(huang)芩(qin)染(ran)料法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說明(ming)書

特點：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只需要(yao)提供病毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地(di)黃(huang)保守序(xu)列(lie)設(she)計的(de)專壹(yi)性(xing)引(yin)物(wu)，與相關病毒(du)無交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏度(du)可以(yi)達到(dao)幾百拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹管式熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體系的(de)熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適用於科(ke)研，不(bu)能用於臨床診斷。

使用方法：
壹、樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食品樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)樣(yang)品(pin)的(de)采集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)《食(shi)品衛生微(wei)生物(wu)學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎腸(chang)桿菌檢(jian)驗要(yao)求進(jin)行(xing)。
2、血液樣(yang)品(pin)：用無菌(jun)註射器抽(chou)取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜脈血(xue)2mL，註入無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉(na))抗凝(ning)管(guan)，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置於滅(mie)菌的(de)收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部位(wei)樣(yang)品(pin)：取發病部(bu)位(wei)新鮮(xian)滲(shen)出(chu)物、粘液膿(nong)血送(song)檢(jian)。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性(xing)對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋度(du)為例）
1. 註意：由(you)於標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)非(fei)常(chang)高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀釋操(cao)作壹(yi)定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立的(de)區域進(jin)行(xing)，千萬不(bu)能汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或(huo)本(ben)試(shi)劑盒(he)的(de)其他(ta)成分）。為增加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)避(bi)免(mian)擴散(san)傳染(ran)性(xing)病原，本(ben)產品(pin)不(bu)提供活體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對照(zhao)，只提供可以(yi)直接(jie)使(shi)用的(de) DNA段作為陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯槍頭(tou)分(fen)別加(jia)入 45 μL 熒光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀釋液（用帶(dai)芯槍頭(tou)，下同）。
4. 在(zai) 7 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在(zai) 6 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)(上步稀釋所得(de))，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在(zai) 5 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)到(dao) 5 號管中，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
7. 重(zhong)復上面(mian)的(de)操(cao)作直到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀釋度(du)的(de)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。放冰上待(dai)用。
註：上述樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經過增菌後，收(shou)集培(pei)養(yang)物(wu)用於檢(jian)測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試(shi)劑盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提液，按(an)以(yi)下說明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸(suan)的(de)粗提。也(ye)可采購(gou)上(shang)海(hai)澤(ze)葉(ye)生物科(ke)技有(you)限公司(si)生(sheng)產的(de)DNA提取試(shi)劑盒(he)(過柱法(fa)-熒光(guang)配(pei)套)或其他合(he)適(shi)的(de)商(shang)業化(hua)產品(pin)，並按照(zhao)相應(ying)試(shi)劑盒(he)說明(ming)進(jin)行(xing)操(cao)作。
1、液體培養(yang)物(wu)：取液體培養(yang)物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸棄上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固體培養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單克(ke)隆菌落與50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於滅(mie)菌離(li)心管(guan)中(zhong)，加(jia)入0.5mL生理鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，13000rpm離心3分鐘，棄上(shang)清，沈澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其他液體標(biao)本(ben)：取標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄上(shang)清，沈澱(dian)中加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註：陽(yang)性(xing)對照(zhao)和(he)陰(yin)性(xing)對照(zhao)為已經抽(chou)提好的(de)核(he)酸(suan)(無需(xu)提取)，直接(jie)取5μL加(jia)入到(dao)反(fan)應(ying)體系中即(ji)可。由於陽(yang)性(xing)對照(zhao)濃(nong)度(du)較高，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制備(bei)區域加(jia)入陽(yang)性(xing)對照(zhao)。 
實驗流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測過程(cheng)應(ying)嚴格按照(zhao)本(ben)說明(ming)書要(yao)求分(fen)別在(zai)試(shi)劑準(zhun)備(bei)區、樣(yang)本(ben)處理區和(he)PCR擴增區進(jin)行(xing)操(cao)作，各(ge)區實(shi)驗(yan)服、儀器 、耗材應(ying)獨(du)立使(shi)用，不(bu)能混(hun)用；實驗(yan)用吸頭(tou)采(cai)用帶(dai)濾芯吸頭(tou)；樣(yang)本(ben)處理區應(ying)配(pei)有生(sheng)物(wu)安全櫃，樣(yang)本(ben)處理在(zai)生物安全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操(cao)作；三個(ge)區應(ying)該配(pei)有紫外(wai)線殺(sha)菌裝置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣(yang)本(ben)處理過程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條件下操(cao)作，且(qie)完成實驗(yan)後立(li)即(ji)上機(ji)檢(jian)測；樣(yang)本(ben)處理過程(cheng)中(zhong)使用的(de)器具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經過無核(he)酶(mei)處理。
3. 每次實驗應(ying)該設(she)置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
4. 試(shi)劑盒(he)所有(you)試(shi)劑在(zai)使用前(qian)應(ying)該在(zai)常(chang)溫下充(chong)分融化混(hun)勻(yun)，並應(ying)瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑盒(he)內(nei)所配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性(xing)對照(zhao)在(zai)壹次使用前(qian)應(ying)全部(bu)轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本(ben)準備(bei)區，並單獨(du)存放。
6. 為防止熒光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸手(shou)直接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應(ying)管，並應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應(ying)管上(shang)進(jin)行(xing)任何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴增相關參(can)數(shu)應(ying)按照(zhao)本(ben)說明(ming)書相關要(yao)求進(jin)行(xing)設(she)置；不(bu)同批(pi)號(hao)試(shi)劑不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列(lie)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參數設(she)置中不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅(mie)基(ji)因(yin)選擇None。
9. 實驗過程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢棄物(wu)應(ying)該進(jin)行(xing)無害(hai)化(hua)處理後方可丟棄。
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理及(ji)保存方法
1. 血清：使用不(bu)含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的(de)試(shi)管，操(cao)作過程(cheng)中(zhong)避(bi)免(mian)任何(he)細胞(bao)刺激，收(shou)集血(xue)液後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘將(jiang)血清和(he)紅細(xi)胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)或肝(gan)素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘取上清。
3. 細胞(bao)上清液：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘去除(chu)顆粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適量(liang)生理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣(yang)本(ben)收(shou)集後不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測，請(qing)按壹(yi)次用量(liang)分裝，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍融，在(zai)室溫下解凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分解凍(dong)。
BRL-3A細胞(bao)，大(da)鼠正(zheng)常(chang)肝(gan)細(xi)胞(bao) SK-N-SH(神經母(mu)細胞(bao)瘤細(xi)胞(bao)) 人髓母細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao);Daoy櫟櫻(ying)酸(suan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Roburic acid質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

CSF2 Protein Rat 重(zhong)組大(da)鼠 GM-CSF / CSF2 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽(qian))連翹(qiao)苷(gan)(標(biao)準(zhun)品(pin))Phillyrin質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

SW626(人卵巢癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 甲型流感(gan) H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝(ning)素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 連翹(qiao)酯苷(gan)A(標(biao)準(zhun)品(pin))Forsythoside A質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

人食道(dao)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)HESMC連翹(qiao)酯苷(gan)B（標(biao)準(zhun)品(pin)）Forsythoside B質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

STXBP3 Others Human 人 STXBP3 / UNC-18C 桿狀病毒(du)-昆蟲(chong)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 蓮心堿（標(biao)準(zhun)品(pin)）Liensinine質量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)
BxPc-3-EGFP-puro (慢病毒(du)構建(jian)穩定(ding)株(zhu))人原位(wei)胰腺腺癌(ai)細胞(bao) BxPc-3-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in situ pancreatic adecarcima cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin1酸二酯酶(mei) (比(bi)活度(du)：>20 U/mg，BC)質量(liang)規(gui)格：比(bi)活度(du)：>20 U/mg，BCPhosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Vem

IL2 Protein Human 重(zhong)組人 Ierleukin-2 / IL-2 蛋(dan)白(bai)化(hua)丙(bing)啶(ding)(>95% (HPLC),BC)質量(liang)規(gui)格：>95% (HPLC),BCPropidium iodide

人食道(dao)上皮細胞(bao)(HEEC)(5×105 ) RN-c, 大(da)鼠皮質神(shen)經元 Rattus血管緊張(zhang)素III質量(liang)規(gui)格：>97%,BRAngiotensin III,human

大(da)額牛皮膚細(xi)胞(bao);BFR-S3蜂毒(du)明肽(tai); 蜂針(zhen)液明(ming)肽(tai)質量(liang)規(gui)格：BR,>97%Apamin

EPHB1 Others Cymolgus 食蟹(xie)猴(hou) EphB1 / EPHT2 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 枸櫞酸(suan)氯(lv)米(mi)芬(fen),克羅米芬(fen)質量(liang)規(gui)格：>98%,BRClomiphene
GB Others Cytomegalovirus/CMV 巨細胞(bao)病毒(du) HCMV gB 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 雜質B質量(liang)規(gui)格：美國(guo)進(jin)口Ranitidine Impurity B

小(xiao)鼠誘導性(xing)多潛(qian)能幹(gan)細(xi)胞(bao);PUMC-mips-B6質量(liang)規(gui)格：美國(guo)進(jin)口Ranitidine

CD59A Others Mouse 小(xiao)鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 2-氨(an)基(ji)-5,6-二氯(lv)-3(4H)-喹唑啉醋酸(suan)(阿(e)那格雷雜(za)質B)質量(liang)規(gui)格：美國(guo)進(jin)口2-Ami-5,6-dichloro-3(4H)-quinazoline Acetic Acid(Anagrelide Impurity B)

C26瘤 結(jie)腸(chang)癌(ai)3-羥基(ji)阿(e)那格雷質量(liang)規(gui)格：美國(guo)進(jin)口3-Hydroxy Anagrelide

THLE-3人肝(gan)永(yong)生化細胞(bao) THLE-3 human liver immortalized cell MD 21793的(de)BEGM培養(yang)基(ji)(目錄號CC3170)雷洛(luo)昔芬(fen)4'-葡萄糖(tang)苷(gan)酸質量(liang)規(gui)格：美國(guo)進(jin)口Raloxifene 4'-Glucuronide
黃(huang)芩(qin)染(ran)料法(fa)PCR鑒定(ding)試(shi)劑盒(he)說明(ming)書MIF Others Mouse 小(xiao)鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 鐵(tie)蛋(dan)白(bai)(馬脾)，英文名或英(ying)文(wen)縮寫：HSF，級別：BR，10-20u/mg，規(gui)格：100u

16HBE 人支氣管(guan)上(shang)皮細胞(bao)1.10-癸二醇 1,10-Dqccnqdiol 11-47-0

CL-0263BGC-803(人胃癌(ai)細胞(bao))5×106cells/瓶×2D-扁桃(tao)醋 Mcndqlic ccid 611-71-

RDFs, 大(da)鼠成纖(xian)維(wei)細胞(bao)MES,FREEACID,MOHYDR