His標簽(qian)純(chun)化(hua)樹(shu)脂（Ni-NTA Resin）

公(gong)司產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

商品屬(shu)性

產品介(jie)紹：

描述(shu)：

Ni-NTA Resin 是(shi)用(yong)於(yu)純(chun)化 6×His 標簽(qian)重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)的壹種純化(hua)介(jie)質(zhi)，它(ta)是(shi)由 4%交(jiao)聯的 Sepharose 耦(ou)連(lian)了壹(yi)種四齒(chi)螯合劑 NTA 而(er)得. 它(ta)可用(yong)於(yu)在(zai)非(fei)變性或變性條件下(xia)純(chun)化任何(he)表(biao)達系統表(biao)達的 6xHis 標簽(qian)重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)。NTA，含(han)有四個(ge)螯合區(qu)，較壹般的三(san)齒(chi)螯合劑能更(geng)好的(de)結合 Ni2+。6×His 可與 Ni2+螯合，從(cong)而(er)使(shi) His 標簽(qian)蛋(dan)白(bai)結合在(zai) Ni-NTA 純(chun)化介(jie)質(zhi)上(shang)，未(wei)結合的(de)蛋白被(bei)洗(xi)滌下去(qu)，結合在(zai)介(jie)質(zhi)上(shang)的蛋白(bai)經(jing)過(guo)壹(yi)定濃(nong)度(du)的(de)咪(mi)唑或低 PH 緩(huan)沖液(ye)被(bei)溫(wen)和(he)的(de)洗(xi)脫(tuo)下來，從(cong)而(er)得到(dao)高(gao)純(chun)度(du)的(de)目(mu)的(de)蛋白。
主要(yao)特(te)征(zheng)
該(gai)純化介(jie)質(zhi)與 His 標簽(qian)蛋(dan)白(bai)具有的(de)親(qin)和力(li)，可達5-20 mg/ml。
可在(zai)非(fei)變性和變(bian)性條件下(xia)純(chun)化任何(he)表(biao)達系統所(suo)得的(de) His標簽(qian)蛋(dan)白(bai)。
純(chun)化程序(xu)簡單，所(suo)得的(de)蛋(dan)白(bai)純度(du)可高達 95％。
Ni-NTA 可再生(sheng) 4-6 次，重(zhong)復(fu)使(shi)用(yong)。
組(zu)成(cheng)：50％的懸(xuan)浮液(ye)（20％乙醇(chun)），已螯合 Ni2+。
應用(yong)
His 標簽(qian)蛋(dan)白(bai)的(de)純化。
蛋白結構與功(gong)能研究(jiu)。
蛋白-蛋白(bai)以(yi)及蛋(dan)白(bai)-DNA 之(zhi)間相互(hu)作用(yong)的(de)研究(jiu)。
配體-受體之間相互(hu)作用(yong)的(de)研究(jiu)。
儲(chu)存：4℃保(bao)存，可保(bao)存 2 年。
操(cao)作方(fang)法(fa)
A. 非(fei)變(bian)性條件下(xia)抽(chou)提 His 標簽(qian)蛋(dan)白(bai)
1. 樣品準(zhun)備
1) 準(zhun)備細胞，接(jie)種，誘(you)導(dao)表(biao)達。對(dui)於(yu)實(shi)驗室用(yong)的(de) pET 載(zai)體表(biao)達系列，在(zai)細胞 OD600=0.5-0.8 時(shi)，用(yong) 1 mM IPTG 誘(you)導(dao) 1-3 小時(shi)，可以(yi)獲得(de)理(li)想(xiang)的表(biao)達效率(lv)。收(shou)集(ji)細胞，置(zhi)於(yu)-70°C或立(li)即(ji)進(jin)行(xing)步(bu)驟(zhou) 2 操(cao)作。
2) 加入(ru) 1/20 細胞生(sheng)長體積(ji)的 NTA-0 Buffer (20 mMTris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl,10% Glycerol)和 1 mM PMSF。
註意(yi)：PMSF 見(jian)水(shui)分(fen)解(jie)，需(xu)要(yao)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)加入(ru)。
3) 將(jiang)細胞懸(xuan)浮起來，超聲或勻漿破碎(sui)細胞。該(gai)步驟冰上(shang)操(cao)作。
4) 加入(ru) 10% Triton X-100, 使(shi)終(zhong)濃(nong)度(du)為 0.05%，充(chong)分混勻，冰上(shang)放置 15 分(fen)鐘。
5) 13,000 轉/分(fen)(20,000xg 以(yi)上(shang))，4°C 離(li)心 15min。取上(shang)清，置於(yu)冰上(shang)備用(yong)或-20°C 保(bao)存。
2. 層析
1) 將(jiang) NTA 樹(shu)脂裝(zhuang)入(ru)合適的層析柱(zhu)，層析用(yong) 10 倍 NTA 體積(ji)的 NTA-0 Buffer 平衡填料。
2) 將(jiang)上(shang)清樣品加至 NTA 層析柱(zhu)中(zhong)，流速在(zai) 15 ml/h 左(zuo)右(you)，收(shou)集(ji)穿(chuan)透(tou)部(bu)分，用(yong)於(yu) SDS/PAGE 分(fen)析蛋白質(zhi)的(de)結合情(qing)況(kuang)。
3) 層析用(yong) 5 倍 NTA 體積(ji)的 NTA-0 Buffer 洗滌填料，流速控制在(zai) 30 ml/h 左(zuo)右(you)。
4) 再分(fen)別用(yong) 5 倍 NTA 體積(ji)的 NTA-20、NTA-50、NTA-100、NTA-250 洗脫填料，流速控制在(zai) 15 ml/h 左(zuo)右(you)，收(shou)集(ji)洗(xi)脫液，每管收(shou)集(ji)壹(yi)個(ge) NTA 體積(ji)。
5) 確定目(mu)標蛋白(bai)質(zhi)在(zai)洗(xi)脫液中的(de)分(fen)布(bu)情(qing)況(kuang)。較(jiao)為有效的方(fang)式是(shi) SDS/PAGE 分析(xi)。也可以(yi)用(yong) Bradford 蛋(dan)白(bai)質(zhi)測定試劑盒(he)，快(kuai)速確定蛋(dan)白質的含(han)量，然(ran)後(hou)用(yong) SDS/PAGE 分(fen)析(xi)蛋(dan)白質的分布(bu)。
6) 目(mu)標蛋白(bai)質(zhi)需(xu)要(yao)進(jin)壹(yi)步純化需(xu)要(yao)根據(ju)蛋白質(zhi)的用(yong)途(tu)確定。純(chun)化的目(mu)標蛋白(bai)質(zhi)的保(bao)存條件需(xu)要(yao)根據(ju)蛋白質(zhi)的性質和(he)用(yong)途(tu)確定。
3. 溶(rong)液配方(fang)
NTA-0 Buffer:
20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,
NTA-20 Buffer:
20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,
20 mM Imidazole(咪(mi)唑)
NTA-50 Buffer:
20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,

公(gong)司正(zheng)在(zai)出售(shou)的產品：