原(yuan)代細胞（Primary cells）：是指(zhi)直(zhi)接(jie)從機(ji)體取(qu)出的組(zu)織或細胞獲(huo)得(de)單(dan)個(ge)細胞並在體(ti)外進(jin)行培(pei)養的細胞。原(yuan)代細胞培(pei)養是指(zhi)將(jiang)組織從動物體內(nei)取(qu)出，經各(ge)種(zhong)酶、螯合(he)劑(ji)(常(chang)用EDTA) 或機(ji)械方法(fa)剪(jian)碎處理(li)，分散成(cheng)單(dan)細胞，在合(he)適(shi)的培(pei)養基中培(pei)養，使(shi)細胞得(de)以(yi)生存、生長(chang)和繁(fan)殖(zhi)的過(guo)程。細胞的分離(li)純(chun)化和細胞培(pei)養技(ji)術(shu)是細胞生物(wu)學實驗的基礎(chu)。我們(men)通(tong)常(chang)把(ba)第壹(yi)代至(zhi)第十(shi)代以(yi)內的培(pei)養細胞統(tong)稱(cheng)為(wei)原(yuan)代細胞。

原(yuan)代細胞分離(li)培(pei)養實驗流程(cheng):
   首(shou)先將(jiang)組織從機(ji)體中取出，經yi 蛋(dan)白(bai)酶/膠原(yuan)酶處理(li)後分散成(cheng)單(dan)細胞，再(zai)在合(he)適(shi)的培(pei)養基中培(pei)養，使(shi)細胞繁(fan)殖(zhi)到壹(yi)定(ding)系(xi)數後進行細胞鑒(jian)定(ding)。
實驗流程(cheng):
1. 取材(cai)：將(jiang)目標(biao)動(dong)物麻(ma)醉(zui)或處死，動物體上(shang)取(qu)出目標(biao)器(qi)官或組織。
2. 原(yuan)代細胞的分離(li)：獲(huo)取(qu)的組(zu)織或器(qi)官中含(han)有(you)血液和多(duo)種(zhong)細胞，我(wo)們(men)將(jiang)獲取(qu)的組(zu)織或器(qi)官在無(wu)菌(jun)環境下充分剪(jian)碎，消(xiao)化，分散成(cheng)單(dan)細胞。根(gen)據目(mu)標(biao)細胞的特(te)點(dian)選擇(ze)不(bu)同(tong)的篩選方(fang)法(fa)， 以(yi)獲得(de)目標(biao)細胞。
3. 培(pei)養和鑒(jian)定(ding)：根(gen)據客(ke)戶的需求，爾(er)丙(bing)生物(wu)將(jiang)獲得(de)的高(gao)純(chun)度原(yuan)代細胞繼(ji)續(xu)培(pei)養或進行傳代培(pei)養，也可(ke)以(yi)凍存處理(li)，滿(man)足不(bu)同(tong)的實驗需求。
   常用的原(yuan)代培(pei)養法(fa)有(you)組織塊培(pei)養法(fa)和消(xiao)化培(pei)養法(fa)。許多(duo)實驗室喜(xi)歡用組織塊培(pei)養法(fa)進行原(yuan)代培(pei)養，因為(wei)方(fang)法簡單，細胞也較(jiao)容(rong)易生長(chang)。尤其是培(pei)養心(xin)肌，有(you)時(shi)還(hai)可(ke)觀察到心肌(ji)組織塊搏(bo)動。細胞從組織塊邊緣(yuan)向(xiang)外(wai)長(chang)出並鋪滿(man)培(pei)養皿(min)或培(pei)養瓶(ping)後， 即可(ke)進(jin)行傳代。
下面(mian)介紹(shao)織塊培(pei)養法(fa)：
1. 操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)
（1）、在無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，取(qu)待培(pei)養的組(zu)織適(shi)量，置入小燒杯中， 以(yi)適(shi)量Hanks 溶(rong)液清洗(xi)2~3 次(ci)，去掉(diao)組織塊表(biao)面的血汙。
（2）、用眼(yan)科剪(jian)將(jiang)組織塊反(fan)復剪(jian)成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）、再(zai)用Hanks 溶液反復(fu)漂洗(xi)， 直(zhi)至(zhi)液體不(bu)混(hun)濁(zhuo)為(wei)止(zhi)。等組織塊下(xia)沈，將(jiang)燒杯傾(qing)斜(xie)，用小吸管盡量(liang)吸除(chu)Hanks 溶液。
（4）、用含(han)20%滅(mie)活(huo)血清及雙抗(kang)溶液(200U/ml 青(qing)黴su、200μg/ml 鏈黴su）的培(pei)養液再清洗(xi)，用吸管吸幹後加(jia)入5ml 含(han)20％血清的培(pei)養液。
（5）、用彎(wan)頭(tou)吸管吸取組織小塊，均(jun)勻地(di)置於培(pei)養皿(min)內表面(mian)，吸(xi)去多(duo)余(yu)的培(pei)養液，各(ge)組(zu)織小塊之間(jian)相距(ju)0.5cm 為(wei)宜。蓋好培(pei)養皿(min)蓋，做好(hao)標(biao)記， 置37°C 的CO2培(pei)養箱(xiang)內。
（6）、2~4h 後，於超(chao)凈(jing)工(gong)作(zuo)臺中，緩緩(huan)地(di)向(xiang)培(pei)養皿(min)中加(jia)入上述含(han)20％血清及雙抗(kang)溶液( 100U/ml 青(qing)黴su及100μg/ml 鏈黴su）的培(pei)養液少量(liang)，以(yi)使組(zu)織塊浸(jin)沒在培(pei)養液中。
（7）、輕輕(qing)地(di)將(jiang)培(pei)養皿(min)及組織塊移(yi)至(zhi)CO2 培(pei)養箱(xiang)， 如無(wu)特(te)殊情況(kuang)，不(bu)必(bi)觀察。1~2 周(zhou)後，可(ke)觀察到細胞從組織塊邊緣(yuan)長(chang)出，形成(cheng)生長(chang)暈。
（8）、 壹(yi)般說來，若培(pei)養液無(wu)明顯(xian)改(gai)變， 1 周(zhou)換(huan)液1 次即(ji)可(ke)。待(dai)細胞長(chang)滿(man)整個培(pei)養皿(min)內表面(mian)，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代培(pei)養。
2. 註(zhu)意事(shi)項(xiang)
（1）、如果(guo)是用培(pei)養瓶(ping)而(er)不(bu)是培(pei)養皿(min)，則接(jie)種(zhong)組織塊千(qian)培(pei)養瓶(ping)底(di)壁後， 要輕(qing)輕地(di)翻(fan)轉培(pei)養瓶(ping)，令瓶底(di)在上(shang)，蓋好(hao)瓶(ping)蓋(gai)後輕輕(qing)置入37°C 的CO2 培(pei)養箱(xiang)， 2~4h 後，取出培(pei)養瓶(ping)，在超(chao)凈(jing)工(gong)作(zuo)臺內(nei)打開(kai)瓶(ping)蓋(gai)，仍(reng)令組(zu)織塊在上(shang)方。在組(zu)織塊對面(mian)瓶壁加(jia)入適(shi)量上(shang)述培(pei)養液。然後，輕輕(qing)翻轉(zhuan)培(pei)養瓶(ping)，讓組織塊浸(jin)沒於培(pei)養液中。蓋好(hao)瓶蓋後放(fang)回(hui)二氧化碳(tan)孵箱(xiang)，繼(ji)續(xu)培(pei)養。
（2）、從培(pei)養皿(min)表面遊(you)離(li)下來的組(zu)織塊，棄(qi)去即(ji)可(ke)。
（3）、如果(guo)使用玻璃(li)培(pei)養瓶(ping)，而(er)不(bu)是新(xin)的塑(su)料培(pei)養瓶(ping)，則最好在玻(bo)璃(li)底(di)表面包(bao)被(bei)大鼠(shu)鼠(shu)尾(wei)膠原(yuan)，這(zhe)樣不(bu)但有(you)利(li)於組(zu)織塊的黏(nian)附，而(er)且可(ke)使(shi)細胞生長(chang)得更好(hao)。
（4）、本(ben)方法適(shi)於各(ge)種(zhong)組織的培(pei)養，操(cao)作(zuo)者還(hai)可(ke)根(gen)據自己的實驗需要(yao)和細胞種(zhong)類加(jia)以(yi)修改(gai)。