pCold-SUMO-10His原核蛋白(bai)表達(da)試劑盒

公司(si)產(chan)品僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)！

商品屬性(xing)

產(chan)品介紹(shao)：

描述(shu)：本試劑盒所包(bao)含的(de)原核表(biao)達(da)載(zai)體(pCold-SUMO-10His)是(shi)在(zai) pCold-SUMO 載(zai)體基(ji)礎上改(gai)造而(er)成(cheng)，

該(gai)載(zai)體啟動子(zi)(CS Promoter)來源(yuan)於(yu)南極(ji)嗜冷細菌(jun)，在(zai)低(di)溫下(15 度)才能啟動蛋白(bai)的(de)表(biao)達。低(di)溫下細菌(jun)生(sheng)長緩(huan)慢，使(shi)得(de)蛋白(bai)合成(cheng)速度(du)減(jian)慢，從(cong)而限(xian)度的(de)提(ti)高了蛋白(bai)正確(que)折(zhe)疊的(de)幾率，提(ti)高了蛋白(bai)可溶(rong)性(xing)表達(da)，增強(qiang)了(le)活(huo)性(xing)蛋白(bai)的(de)表(biao)達比率。該(gai)表達(da)系(xi)統(tong)所包(bao)含的(de) SUMO tag 可以(yi)極大(da)地(di)提(ti)高小(xiao)分(fen)子(zi)量蛋白(bai)的(de)表(biao)達量，而且進(jin)壹步提(ti)高了蛋白(bai)的(de)可溶(rong)表(biao)達(da)幾率。同時，TEE 信(xin)號肽(tai)可增強(qiang)冷啟動子(zi)調(tiao)控(kong)下(xia)目(mu)的(de)蛋白(bai)的(de)高表達(da)。
改(gai)進後(hou)的(de) pCold-SUMO-10His 載(zai)體，其(qi) SUMO 蛋白(bai)標(biao)簽(qian)含有(you) 10 個組氨(an)標(biao)簽(qian)（10His tag），使(shi)其(qi)結合 Ni-NTA 的(de)能力更(geng)強(qiang)。與較早(zao)版本(ben)的(de) pCold-SUMO 表(biao)達系(xi)統(tong)相比，pCold-SUMO-10His 表達系(xi)統(tong)在(zai)保(bao)留了原有(you)統的(de)蛋白(bai)可溶(rong)性(xing)能生(sheng)產(chan)能力、高特異(yi)性(xing)剪切能力的(de)情(qing)況下，對(dui) Ni-NTA 結(jie)合(he)能力的(de)得(de)到明(ming)顯(xian)提(ti)高。其對(dui) Ni-NTA 結(jie)合(he)能力的(de)提(ti)高，

在(zai)以(yi)下三(san)個(ge)方(fang)面改(gai)善了生(sheng)產(chan)重(zhong)組蛋白(bai)的(de)性(xing)能：

（1）提(ti)高了粗(cu)蛋白(bai)樣品中目(mu)標(biao)蛋白(bai)的(de)捕獲能力，從(cong)而提(ti)高純化產(chan)量(liang)；

（2）在(zai)蛋白(bai)純化過(guo)程(cheng)中(zhong)可以(yi)
使(shi)用(yong)更高濃度(du)的(de)咪(mi)唑(zuo)進(jin)行(xing)漂洗，去雜(za)蛋白(bai)的(de)能力明(ming)顯(xian)提(ti)升，從(cong)而獲得(de)更(geng)高純度的(de)重(zhong)組蛋白(bai)；

（3）在(zai)重組蛋白(bai)酶(mei)切去(qu)除 SUMO標(biao)簽(qian)後(hou)，利用 Ni-NTA 去除 SUMO 標(biao)簽(qian)更(geng)為(wei)，獲得(de)純度更(geng)高的(de)無(wu)標(biao)簽(qian)目(mu)標(biao)蛋白(bai)。
關於(yu)宿主(zhu)菌的(de)使(shi)用(yong)：本試劑盒配備了(le)兩(liang)種(zhong)宿主(zhu)表達菌(jun)感受(shou)態(tai)細胞，Lyophilized Arctic (DE3)感受(shou)態(tai)和(he) LyophilizedBL21(DE3) Chaprone 感受(shou)態(tai)，兩(liang)種(zhong)感受(shou)態(tai)均為(wei)凍(dong)幹品形(xing)式(shi)可長期(qi)保(bao)存(cun)在(zai)-20℃，效價(jia)無(wu)明(ming)顯(xian)下降（2~10X10e5 cfu/μg）。
通常在(zai)質粒(li)載(zai)體的(de)構(gou)建完成(cheng)，並(bing)測(ce)序(xu)驗證後(hou)，可將重組質粒(li)轉(zhuan)入(ru)該(gai)感受(shou)態(tai)進(jin)行(xing)蛋白(bai)表達(da)。該(gai)宿主(zhu)菌僅(jin)為(wei)蛋白(bai)表達(da)生(sheng)產(chan)用(yong)，不可以(yi)進行(xing)載(zai)體構(gou)建和(he)質粒(li)的(de)提(ti)取制備(bei)。由(you)於(yu) pCold-SUMO 系(xi)統(tong)的(de)高可溶(rong)性(xing)表達(da)特(te)性(xing)，在(zai)大(da)多數情況(kuang)下重(zhong)組蛋白(bai)在(zai) LyophilizedArctic (DE3)感受(shou)態(tai)即(ji)可獲得(de)理想(xiang)的(de)可溶(rong)表(biao)達(da)，因此實驗(yan)請選(xuan)用(yong) Lyophilized Arctic (DE3)感受(shou)態(tai)宿(xiu)主(zhu)菌(jun)。

在(zai) LyophilizedArctic (DE3)感受(shou)態(tai)宿(xiu)主(zhu)菌(jun)可溶(rong)表(biao)達(da)效果不理想(xiang)的(de)情(qing)況下，再選(xuan)用(yong)操(cao)作相對(dui)復(fu)雜(za)的(de)、帶(dai)有(you)輔助(zhu)折(zhe)疊伴(ban)侶(lv)分(fen)子(zi)的(de) LyophilizedBL21(DE3)Chaprone 宿(xiu)主菌，該(gai)系(xi)統(tong)可獲得(de)的(de)可溶(rong)表(biao)達(da)。除此外，pCold-SUMO 系(xi)統(tong)在(zai)常規(gui) BL21(DE3)、BL21(DE3)plys等(deng)宿(xiu)主菌內(nei)均可獲得(de)可觀(guan)的(de)可溶(rong)性(xing)表達(da)。
關(guan)於(yu)蛋白(bai)酶(mei)的(de)使(shi)用(yong)：試劑盒配備了(le) SUMO 蛋白(bai)酶(mei)（酵(jiao)母(mu)來源(yuan)，也(ye)稱(cheng)為(wei) UIP 蛋白(bai)酶(mei)）和(he) rTEV 蛋白(bai)酶(mei)，在(zai)第壹(yi)步載(zai)體構(gou)建過(guo)程(cheng)中(zhong)需(xu)要評(ping)估(gu)、考(kao)慮(lv)兩(liang)個蛋白(bai)酶(mei)的(de)使(shi)用(yong)策(ce)略(lve)。SUMO 蛋白(bai)酶(mei)識(shi)別蛋白(bai)結構(gou)，切割活(huo)性(xing)高、酶(mei)切，對(dui)於(yu)需要去(qu)除 Tag的(de)重(zhong)組蛋白(bai)其是(shi)。個(ge)別情況下 SUMO 標(biao)簽(qian)的(de)結(jie)構(gou)會受(shou)到 C 端重組目(mu)標(biao)蛋白(bai)的(de)影響(xiang)，使(shi)得(de) SUMO 蛋白(bai)酶(mei)對(dui)重(zhong)組融合蛋白(bai)的(de)切割效率降低(di)、甚(shen)至(zhi)是無(wu)效，此時再選(xuan)用(yong) rTEV 蛋白(bai)酶(mei)進(jin)行酶(mei)切。由(you)於(yu) rTEV 蛋白(bai)酶(mei)識(shi)別氨(an)基(ji)酸序列(lie)，個別重組融合蛋白(bai)會包(bao)埋(mai)識別序列，因此也(ye)會導(dao)致蛋白(bai)酶(mei)切效(xiao)率(lv)下(xia)降(jiang)。由於(yu)重組融合蛋白(bai)結構(gou)的(de)無(wu)法(fa)預測(ce)性(xing)，因此在(zai)實驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)兩(liang)種(zhong)蛋白(bai)酶(mei)的(de)酶(mei)切均需要測(ce)試。無(wu)論如何，通(tong)常(chang) SUMO 蛋白(bai)酶(mei)具(ju)有(you)更高的(de)效(xiao)率。本試劑盒配備的(de) SUMO 蛋白(bai)酶(mei)可以(yi)識別 SUMO標(biao)簽(qian)結(jie)構(gou)（SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG）切割位點(dian)位於(yu) QIGG 之後(hou)。SUMO 蛋白(bai)酶(mei)含有(you)雙 His 標(biao)簽(qian)，保(bao)證了 SUMO 蛋白(bai)酶(mei)高親力的(de)結(jie)合 Ni-NTA，以(yi)限(xian)度的(de)去(qu)除 SUMO 蛋白(bai)酶(mei)（分(fen)子(zi)量約(yue) 26kD）。rTEV 蛋白(bai)酶(mei)可以(yi)識別 SUMO 標(biao)簽(qian)後(hou)面的(de) Glu-AsnLeu-Tyr-Phe-Gln-Gly (ENLYFQG)氨(an)基(ji)酸序列(lie)，並(bing)在(zai)識別位點(dian) Gln-Gly(QG)之(zhi)間(jian)進(jin)行切割，從(cong)而去(qu)除 SUMO 標(biao)簽(qian)。rTEV 蛋白(bai)酶(mei)含有(you) 6XHis 標(biao)簽(qian)（分(fen)子(zi)量約(yue) 30kD），可使(shi)用(yong) Ni-NTA 純化介質去除。
本試劑盒配備的(de) pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 為(wei)蛋白(bai)表達(da)陽(yang)性(xing)質粒(li)，該(gai)質粒(li)含有(you) 43kD 的(de)目(mu)標(biao)蛋白(bai)，其與SUMO 標(biao)簽(qian)（19kD）融合後(hou)分(fen)子(zi)量約(yue)為(wei) 62kD。該(gai)表達(da)質粒(li)在(zai) Arctic (DE3)中即(ji)可獲得(de)良好的(de)表(biao)達。其可以(yi)僅(jin)可做(zuo)為(wei)表(biao)達、酶(mei)切實驗(yan)的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照品。

公司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品：