RD人橫(heng)紋(wen)肌(ji)肉瘤細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放(fang)置於凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復蘇細胞：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄去上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入含適量(liang)培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天換液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況而定），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大(da)部分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回操作臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比例分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中或(huo)者瓶中，置於培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入無(wu)血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位置以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先觀察細(xi)胞(bao)瓶是否完好，培(pei)養(yang)液是否有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象 發生(sheng)請及時和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如細胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子等，確(que)保(bao)細胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責任由 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)狀態。因運(yun)輸(shu)問題，部分細(xi)胞由於溫度 變化(hua)及(ji)劇烈碰亡(wang)破碎形成碎(sui)片，是正常(chang)現(xian)象。觀察好細胞狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置於培(pei)養(yang)箱中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用(yong)相同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前(qian) 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我司(si)技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交流(liu)。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定的(de)情(qing)況，請及時和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體情況，以(yi)便(bian)我們的技(ji)術人員(yuan)跟蹤回訪直(zhi)至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞，請換用(yong)按照說明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新(xin)配(pei)制的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的(de)產品(pin)：

CL-0207SHG-44 (人膠(jiao)質(zhi)瘤細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2 大(da)鼠(shu)脫(tuo)氫(qing)表雄(xiong)酮S7(DHEA-S7)ELISA 試(shi)劑盒 HSF1  大(da)鼠(shu)熱休(xiu)克(ke)因子1 96T

MC3 Receptor： 黑素皮質(zhi)素3受體抗體 tTA基因修飾的(de)小鼠(shu)畸胎瘤細(xi)胞(bao)(B類);P19-CAG-tTA-3C3

QSG-7701(人正常(chang)肝細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 SK-N-SH(神(shen)經(jing)母細胞(bao)瘤) 大(da)鼠(shu)脫(tuo)氫(qing)表雄(xiong)酮(DHEA)ELISA試(shi)劑盒 PDGF-AB(Human Platelet-Derived Growth Factor AB)  人血血小板衍生(sheng)生(sheng)長因子AB 96T

Menin： Menin抑(yi)癌蛋(dan)白抗體 人結直(zhi)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao);HCT-15 [HCT15]

白細胞介素-6超家(jia)族 大(da)鼠(shu)脫(tuo)氫(qing)表雄(xiong)酮(DHEA)ELISA 試(shi)劑盒 PDGFsR- Alpha(Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor Alpha)  人血血小板衍生(sheng)生(sheng)長因子可溶性受體α 96T

IL-16： 白介素16抗體 細胞

P388D1(小鼠(shu)淋(lin)巴(ba)樣瘤細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao)) 人表面(mian)膜(mo)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白D(mIgD)ELISA 試(shi)劑盒 HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨(ju)細(xi)胞病(bing)毒UL49抗原 0.5mg

Inhibin beta B： 抑(yi)制素βB/Inhibin β B抗體 人心肌(ji)細胞(bao)-HCM-a

CCL24 Protein Human 重組(zu)人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 人表面(mian)膜(mo)免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋(dan)白A(mIgA)ELISA 試(shi)劑盒 MC-1R (melanocortin-1-receptor) 黑皮質(zhi)素-1受體抗原 0.5ml

IL-11： 白介素11抗體 CHN1 Others Human 人 CHN1 / Chimerin 1 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

RD人橫(heng)紋(wen)肌(ji)肉瘤細(xi)胞(bao)Phospho-RASGRF1 (Ser929)： 0酸化(hua)Ras特異性鳥核(he)苷(gan)酸釋(shi)放(fang)因子1 0.1ml

Rhesus antibody Rh LRFN4 富含亮重復序(xu)列(lie)/Ⅲ型(xing)纖(xian)維連(lian)接(jie)蛋(dan)白4抗體 ICAM2 Others Human 人 ICAM-2 / CD102 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照(zhao))

人真(zhen)皮(pi)成纖(xian)維細胞(bao)-胎兒(er)RNAHEF-f miRNA5 μg 大(da)鼠(shu)促甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)激素(TSH)ELISA試(shi)劑盒 PYD(Human Pyridinoline crosslinks)  人膠(jiao)原交聯(lian) 96T

phospho-RAD9(Ser380)： 0酸化(hua)細(xi)胞(bao)周(zhou)期檢(jian)查(zha)控制蛋(dan)白質(zhi)抗體 非洲綠猴(hou)腎(shen)細(xi)胞(bao);CV-1

人男(nan)性正常(chang)細胞(bao);Hs68 人結腸(chang)粘(zhan)膜(mo)上(shang)皮細胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠(shu)促甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)激素(TSH)ELISA 試(shi)劑盒 SPA(Human Staphylococal protein A)  人葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)蛋(dan)白A 96T